国家自然科学基金(81170573)
- 作品数：13 被引量：38H指数：4
- 相关作者：邵根宝张柳平金洁潘耀谦魏野更多>>
- 相关机构：江苏大学河南科技学院江苏大学附属人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的卵巢癌稳转细胞株,为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒,紫外分光光度计检测质粒纯度,计算A260/A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T,取转染THM质粒后的293T细胞,在倒置荧光显微镜下观察转染情况;分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞,收集病毒上清液,感染人卵巢癌SKOV3细胞(分别记为观察组和对照组),筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度(0、1、10、100、1 000 ng/m L)多西环素诱导,以及两组均经100 ng/m L多西环素诱导后,采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260/A280在2.0左右,说明纯度较高;THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光,为真核载体表达的绿色荧光蛋白,表明成功转染。随着多西环素浓度的升高,观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,各浓度间比较有统计学差异(P均<0.01)。观察组经100 ng/m L多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后(P均<0.01)。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株,并经不同浓度多西环素诱导鉴定;该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。
- 万晓蕾赖文升邵根宝李袁霞刘秀雯金洁吴朝阳
- 关键词：RNA干扰人卵巢癌SKOV3细胞
- 曲古抑菌素A对卵巢癌细胞分化、增殖的影响及其机制被引量：2
- 2016年
- 目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系HO8910,将细胞分为A、B、C、D组,分别加入0、100、200、400 nmol/L TSA。分别于培养24、48、72 h观察A、C组细胞形态变化;于培养24 h后采用Western blotting法检测四组细胞中的Y染色体上的性别决定区盒2(SOX-2)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)和叉头样转录因子A2(FOXA-2)。分别采用MTT法及Ed U染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测不同周期细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中的Cyclin D1和p21Cip1蛋白。结果 A组细胞多为类圆形或椭圆形,外表规整,成簇生长。C组细胞发生形态转变,细胞密度有所下降。与A组相比,B、C、D组细胞中SOX-2、OCT-4表达下调,FOXA-2表达升高(P均<0.05)。与A组相比,B、C、D组细胞增殖率降低,G_0/G_1期细胞比例增高,S期细胞比例减小,Cyclin D1蛋白表达下调,p21Cip1蛋白表达上调(P均<0.05)。结论 TSA可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,抑制细胞增殖,其机制可能与调节细胞分化相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。
- 赖文升史紫君万晓蕾薛晶邵根宝邹圣强
- 关键词：曲古抑菌素A卵巢癌细胞分化细胞周期蛋白D1细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂
- 成年小鼠睾丸间质细胞的分离、鉴定及功能检测被引量：5
- 2013年
- 为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行I型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞。细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-steroid-dehydrogenase,3β-HSD)染色鉴定。将分离纯化的睾丸间质细胞进行体外培养,在基础睾酮和人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激培养条件下,用放射免疫分析法对培养上清中的睾酮含量进行检测。结果显示,通过该方法能获得高纯度成年小鼠睾丸间质细胞(>95%),培养的睾丸间质细胞具有分泌基础睾酮以及对hCG刺激反应的能力。提示采用该方法对成年小鼠睾丸间质细胞进行分离纯化具有高效性、可用性,通过该方法获得的睾丸间质细胞是体外研究药物对睾酮分泌功能影响的良好模型。
- 张柳平邵根宝潘耀谦
- 关键词：睾丸间质细胞成年小鼠
- PBL教学模式引入留学生医学细胞生物学教学的探讨被引量：5
- 2017年
- 针对医学留学生这个特殊的授课群体,探索更有效的教学模式,提高教学质量意义深远。文章探讨了在医学细胞生物学教学中引入基于问题的教学模式(problem-based learning,PBL)的优势、实施过程以及存在问题和对策,以提高教学质量。
- 邵根宝金洁龚爱华张柳平杜凤移彭婉昕
- 关键词：医学细胞生物学PBL教学模式留学生教育
- LSD1、NDRG1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响及两者的关系被引量：3
- 2017年
- 目的观察赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响,并探讨两者的作用关系。方法取人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA方法建立诱导型干扰LSD1的SKOV3细胞株(LSD1-shRNA-SKOV3),将其分为对照组、Dox组、转染组和联合组。对照组用水处理,Dox组用100 ng/m L Dox处理,转染组转染NDRG1 siRNA,联合组转染NDRG1 siRNA的同时加入100 ng/m L Dox处理。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测4组LSD1、NDRG1基因mRNA和蛋白表达;染色质免疫沉淀ChIP法和实时荧光定量PCR法分析对照组和Dox组NDRG1基因启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)程度;Transwell小室测算4组细胞迁移率。结果 Dox组、转染组、联合组、对照组LSD1mRNA表达分别为0.407±0.029、0.936±0.024、0.413±0.018、0.941±0.035,蛋白表达分别为0.306±0.013、0.879±0.036、0.341±0.057、0.893±0.052,Dox组、联合组与对照组相比,P均<0.05。Dox组、转染组、联合组、对照组NDRG1 mRNA表达分别为0.791±0.045、0.107±0.016、0.165±0.021、0.239±0.027,蛋白表达分别为0.907±0.005、0.130±0.006、0.216±0.019、0.358±0.062,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。Dox组、对照组细胞NDRG1基因启动子区H3K4me2水平分别为3.32±0.41、0.83±0.17,两组相比P<0.01。Dox组、转染组、联合组、对照组细胞迁移率分别为21.75%±1.816%、79.13%±2.561%、40.13%±2.039%、68.91%±3.167%,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。结论 LSD1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力降低,NDRG1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力升高;LSD1通过降低NDRG1基因启动子区域H3K4me2水平,抑制NDRG1的表达,从而促进卵巢癌SKOV3细胞转移。
- 邵根宝王冉冉魏野金洁张柳平
- 关键词：表观遗传调控
- 赖氨酸特异性去甲基化酶1对曲古抑菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡的作用被引量：4
- 2017年
- 目的赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)是黄素腺嘌呤二核苷酸依赖的胺氧化酶,其参与细胞的增殖、分化以及介导基因激活和抑制等多种生物学过程。文中旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对LSD1的乙酰化,以及LSD1在TSA诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法利用RNA干扰方法建立诱导型稳定敲低LSD1基因表达的卵巢癌HO8910和SKOV3细胞株;实验设置p LKO对照组(感染空载体慢病毒)、p LKO+Dox(100 ng/m L)组、LSD1-KD组(感染LSD1-shRNA慢病毒)和LSD1-KD+Dox(100 ng/m L)组。用免疫沉淀(IP)和Western blot检测LSD1乙酰化程度,及其底物组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)水平;AnnexinⅤ/PI和流式细胞术分析细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和p21 mRNA表达水平;染色质免疫沉淀(Ch IP)分析Bax和p21基因启动子区H3K4me2程度。实验设置methanol对照组(2 mg/m L)、TSA组(200 nmol/L)、TCP组(抑制LSD1活性;100μmol/L)和TSA+TCP组,处理细胞48 h。在RNA干扰LSD1表达实验中,设置溶剂对照组(2 mg/m L methanol)、TSA处理组(200 nmol/L)、Dox组(干扰LSD1表达;100 ng/m L)和联合处理组(200 nmol/L TSA与100ng/m L Dox)联合处理细胞48h。结果免疫沉淀结合Western blot检测结果显示,200nmol/L TSA处理后LSD1蛋白的乙酰化和H3K9的乙酰化水平较methanol溶剂处理显著增加(P<0.01)。与methanol溶剂对照处理比较,200nmol/L TSA处理HO8910和SKOV3细胞后H3K4me2水平明显升高(P<0.01)。AnnexinⅤ/PI结果显示,与methanol对照组比较,TSA组、TCP组和TSA+TCP组HO8910和SKOV3细胞的总凋亡率均显著升高(P<0.05);且TSA+TCP组较TSA组和TCP组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。LSD1-KD+Dox组细胞中LSD1蛋白水平(HO8910:0.21±0.16;SKOV3:0.26±0.11)较p LKO对照组(HO8910:1.15±0.16;SKOV3:0.97±0.31)和LSD1-KD组(HO8910:1.07±0.19;SKOV3:0.98±0.21)显著减少(P<0.01)。与溶剂对照组比较,TSA处理组、Dox组和联合处理组细胞的总凋亡率均显�
- 邵根宝魏野王冉冉金洁林琼
- 关键词：曲古抑菌素A乙酰化凋亡卵巢癌
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶5促进人卵巢癌HO8910细胞迁移
- 2020年
- 目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltransferase 5,PRMT5)对人卵巢癌HO8910细胞上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)和迁移能力的影响。方法:利用瞬时转染方法建立PRMT5过表达的HO8910细胞株,设空白对照组(野生型HO8910细胞株)、阴性对照组(转染pCMV-myc质粒)、实验组(转染pCMV-Myc-PRMT5质粒);同时采用shRNA干扰方法建立诱导型稳定敲低PRMT5基因的HO8910细胞株,设pLKO对照组(感染空载体慢病毒)、pKLO+Dox(100 ng/mL)组、shPRMT5组(感染PRMT5 shRNA慢病毒)和shPRMT5+Dox(100 ng/mL)组;通过免疫印迹和qRT-PCR实验检测PRMT5 mRNA表达和干扰效率。实验分为shPRMT5组、shPRMT5+Dox组、pCMV-Myc组、pCMV-Myc-PRMT5组;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫印迹法检测EMT相关蛋白表达。结果:免疫印迹和qRT-PCR验证成功建立过表达PRMT5和稳定诱导型敲低PRMT5的卵巢癌HO8910细胞株。PRMT5敲低后,卵巢癌HO8910细胞迁移能力显著下降(P均<0.01),间质标志相关分子包括基质金属蛋白酶2,波形蛋白,N-钙黏蛋白表达下调,上皮标志分子E-钙黏蛋白表达上调。此外,在卵巢癌细胞中外源表达PRMT5可显著促进HO8910细胞迁移(P均<0.05)。结论:PRMT5能够促进卵巢癌HO8910细胞EMT进程,促进细胞迁移。
- 赵康容孙爱琴林琼邵根宝
- 关键词：上皮间质转化卵巢癌迁移
- 组蛋白甲基化修饰酶调节自噬的研究进展被引量：2
- 2019年
- 自噬广泛存在于真核细胞生物体内,是一种高度保守的溶酶体依赖性降解途径,对于维持自身稳态以及应激适应非常重要[1]。表观遗传因素以及相关的分子在自噬中发挥越来越重要的作用。组蛋白氨基酸残基修饰是基因表达中表观遗传的主要机制,组蛋白甲基化异常与多种肿瘤的发生发展密切相关。组蛋白赖氨酸残基的甲基化位点经组蛋白赖氨酸甲基转移酶和组蛋白赖氨酸去甲基化酶协同调节,转移或脱去甲基基团。组蛋白甲基化与自噬体形成、自噬相关蛋白表达和信号通路激活有关。各种致癌和抑癌蛋白通过表观遗传修饰和不同的信号通路参与自噬,从而影响肿瘤的发生。本文对组蛋白甲基转移酶(histone methyltransferase,HMT)和组蛋白去甲基化酶(histone demethylases,HDM)调节自噬的相关研究进展进行综述。
- 赵康容韩田田林琼邵根宝
- 关键词：自噬组蛋白甲基转移酶
- 蛋白质精氨酸甲基转移酶5对人卵巢癌HO8910细胞增殖能力的影响被引量：4
- 2018年
- 目的蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)可通过表观遗传或翻译后甲基化修饰的方式参与众多的生物学调控。文中旨在探讨PRMT5对卵巢癌HO8910细胞增殖能力的影响。方法利用瞬时转染的方法获得PRMT5过表达的HO8910细胞株,分为空白对照组(野生型HO8910细胞株)、阴性对照组(转染p CMV-myc质粒的HO8910细胞)、实验组(转染p CMV-myc-PRMT5质粒的HO8910细胞)。Western blot检测3组细胞标签蛋白myc的表达,qRT-PCR检测3组细胞PRMT5mRNA的表达。另利用shRNA干扰方法建立诱导型稳定敲低PRMT5基因的HO8910细胞株,分为p LKO对照组(感染空载体慢病毒)、p LKO+Dox(100 ng/m L)组、sh PRMT5组(感染PRMT5-shRNA慢病毒组)和sh PRMT5+Dox(100 ng/m L)组。用不同浓度梯度的Dox诱导敲低(Dox 0 ng/m L、1 ng/m L、10 ng/m L、100 ng/m L)48 h,Western blot、qRT-PCR检测PRMT5的蛋白和mRNA的表达。克隆形成实验、Ed U实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力;实验细胞分为Dox-组、Dox+组、p CMV-myc组、p CMV-mycPRMT5组。Western blot检测细胞PRMT5的表达对增殖相关蛋白的影响。结果 Western blot结果显示,空白对照组和阴性对照组均无标签蛋白myc的表达,而实验组检测到myc的表达,qRT-PCR检测实验组PRMT5 mRNA表达远高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。与p LKO对照组细胞中PRMT5的蛋白表达水平(1.05±0.11)比较,sh PRMT5+Dox组(0.32±0.25)和sh PRMT5组PRMT5的蛋白表达(0.89±0.18)显著减少(P<0.05)。qRT-PCR结果同样显示,sh PRMT5+Dox较sh PRMT5组PRMT5 mRNA表达显著降低(P<0.01)。Western blot和qRT-PCR证实PRMT5在用Dox 10 ng/m L(0.21±0.24)和100 ng/m L(0.08±0.15)诱导后相较于无Dox处理显著下调(P<0.05)。Dox-组细胞形成的克隆数[(161±15)个]显著高于Dox+组细胞克隆数[(73±8)个],差异具有统计学意义(P<0.01)。p CMV-myc-PRMT5组克隆数[(193±15)个]明显高于p CMV-myc组克隆数[(102±12)个],差异有统计学意义(P<0.01)。Dox-组正在进行DNA复制的
- 魏野王冉冉韩田田赵康荣林琼邵根宝
- 关键词：卵巢癌增殖
- 半胱亚磺酸脱羧酶和牛磺酸转运体mRNA在成年小鼠睾丸间质细胞的表达被引量：1
- 2013年
- 为检测成年小鼠睾丸间质细胞是否存在牛磺酸生物合成关键酶半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)和牛磺酸转运体(TauT)mRNA的表达,通过Percoll分离液分离纯化成年小鼠睾丸间质细胞,运用RT-PCR方法测定睾丸间质细胞中CSD和TauT mRNA表达情况。结果显示,成年小鼠睾丸间质细胞存在CSD和TauT mRNA表达。说明成年小鼠睾丸间质细胞能通过CSD途径合成牛磺酸以及睾丸间质细胞可能存在牛磺酸的转运活动。
- 张柳平潘耀谦邵根宝
- 关键词：睾丸间质细胞
