国家重点基础研究发展计划(2011CB707400)
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 相关作者：吴斌何冰芳田朝光林良才柏中中更多>>
- 相关机构：南京工业大学中国科学院天津工业生物技术研究所吉林大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目江苏省高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 木质纤维素酸解副产物对D-乳酸生产菌Sporolactobacillus sp.Y2-8生长及发酵的影响
- 2014年
- 选择乙酸根、糠醛、5-羟甲基糠醛、苯酚、香草酸和丁香醛等6种典型木质纤维素酸解副产物,考察它们对D-乳酸生产菌Sporolactobacillus sp.Y2-8生长及发酵的影响。实验结果表明:酚类物质抑制作用最强烈,0.25 g/L丁香醛已经完全抑制了菌体的生长和D-乳酸的发酵;苯酚和香草酸在低浓度(≤1.0 g/L)时抑制作用较小,但质量浓度达到3 g/L时对D-乳酸产量的抑制率分别为99%和70%;3 g/L糠醛和5-羟甲基糠醛对产物的抑制率分别为60%与20%,抑制作用小于酚类;乙酸根的影响最小,10 g/L的乙酸钠对菌体的生长和发酵几乎无抑制作用;当抑制物混合时,存在着相互促进作用,抑制作用更强烈。
- 吴利娟吴斌何冰芳
- 关键词：木质纤维素
- 固态发酵基质的三相结构变化对其传递性质的影响被引量：8
- 2012年
- 以汽爆稻草和培养液分别作为基质的固、液相,讨论了工业发酵颗粒尺寸(6.5～0.4cm)和含水量(60%～85%)范围内,基质的保水性、透气性及热导性随三相结构变化的规律。液相在三相结构变化中起主导作用,进而提出基于变异系数权重法的三相结构指数;基质水分蒸发速率随三相结构指数呈指数增加趋势,并伴有明显波动,表明基质保水性受三相组成外其他因素的影响;基质透气性与三相结构指数的关系符合Bidoser-esp函数;基质的热性质(比热容、热阻、热导率)随三相结构指数的增加呈幂指函数变化趋势。统计分析同时佐证了三相结构指数能够反映基质含水量和颗粒度两因素对传递性质的综合影响。所建立的三相结构指数能够用于明确表征基质结构对其传递性质的影响,具有宏观指导意义。
- 段颖异陈洪章
- 关键词：含水量颗粒尺寸保水性透气性热导性
- 里氏木霉表达系统构建和优化
- 里氏木霉(Trichoderma reesei)作为纤维素酶工业中主要的生产菌株,在分泌能力方面有着巨大的优势。我们在前期以诱变、实验室驯化等手段获得一株胞外分泌能力强的高产菌株,并以此作为高效分泌表达的真核底盘细胞。首...
- 邹根江艳萍陈玲刘睿王成树周志华
- 关键词：里氏木霉工程菌株
- 文献传递
- D-乳酸生产菌菊糖芽孢乳杆菌来源的D-乳酸脱氢酶同工酶
- 2016年
- 【目的】菊糖芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus inulinus)作为典型的同型发酵产D-乳酸的优势菌株,能够高效生产高纯度的D-乳酸。该菌株发酵受到多方面环境因素影响。糖代谢的关键酶例如葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶以及乳酸脱氢酶均为由葡萄糖代谢成为乳酸的关键酶,该菌中相关代谢酶的研究是发酵调控至关重要的基础。分析S.inulinus的基因组表明有3个推测为D-乳酸脱氢酶的基因,其中已有报道研究了1个双功能蛋白[bifunctional protein(BP)]。本研究分别克隆并解析了另2个D-乳酸脱氢酶同工酶的性质。【方法】本研究以S.inulinus Y2-8基因组DNA为模板,克隆得到2个D-ldh基因(dldh、dhdh),经测序分别为D-乳酸脱氢酶[D-lactic acid dehydrogenase(DLDH)]和D-羟基酸脱氢酶[D-isomer specific 2-hydroxyacid dehydrogenase(DHDH)]的基因。构建的重组菌表达蛋白DLDH,DHDH均具有催化丙酮酸生成D-乳酸的功能。【结果】重组菌表达的蛋白经镍柱亲和层析达到电泳纯。SDS-PAGE分析表明DLDH的表观分子量为37 k Da,DHDH的表观分子量为39 k Da。此外,DLDH以丙酮酸为底物时Km值为(0.58±0.04)mmol/L,对底物有较高的亲和力,最适反应温度为35°C,最适p H为6.5;而DHDH以丙酮酸为底物时Km值为(1.70±0.08)mmol/L最适反应温度为30°C,最适p H为7.5。另有报道的BP以丙酮酸为底物时Km值为(3.40±0.02)mmol/L,最适反应温度为30°C,最适p H为5.5。【结论】根据对底物丙酮酸的亲和力,最适温度及最适p H,推测DLDH是乳酸发酵中产D-乳酸的主导催化剂。结合相关酶学性质的分析可为今后的发酵调控提供理论依据。
- 张淡如郑璐吴斌何冰芳
- 关键词：克隆酶学性质
- 粗糙脉孢菌木质纤维素降解利用研究进展被引量：9
- 2014年
- 粗糙脉孢菌作为木质纤维素降解真菌,不仅具有完整的木质纤维素降解酶系,而且还拥有全基因组基因敲除突变体库,是研究丝状真菌纤维素酶表达分泌和木质纤维素降解机制的优秀体系。近年来,国内外利用粗糙脉孢菌系统,在木质纤维素降解机制方面取得了显著进展,包括纤维素酶信号传导、调控以及生物质降解后糖的转运利用等。笔者就相关方面的进展进行综述,并对利用粗糙脉孢菌研究木质纤维素降解利用进行展望,总结和分析木质纤维素降解机制研究的国际前沿动态,有助于加深本领域研究人员对真菌体系纤维素降解机制的理解。
- 林良才李金根王邦裴雪田朝光
- 关键词：粗糙脉孢菌木质纤维素纤维素酶
- 木质纤维素酶基因资源挖掘及真菌酶系改造被引量：1
- 2014年
- 简述了木质纤维素酶基因资源挖掘的策略和方法及其在丝状真菌酶系改造中的应用。从候选基因的获取(木质纤维素酶基因资源的挖掘和高效利用)、外源基因的表达、酶系的复配和重构等方面综述了丝状真菌酶系改造的最新进展,并提出了丝状真菌酶系改造中亟须解决的关键问题。
- 邹根刘睿魏勇军周志华严兴
- 关键词：木质纤维素酶系丝状真菌
- β-1,3-1,4葡聚糖酶在大肠杆菌中的高效分泌表达
- 2015年
- 在大肠杆菌中实现β-1,3-1,4-葡聚糖酶的高效分泌表达。将实验室自主开发的信号肽ff53与β-1,3-1,4-葡聚糖酶成熟肽基因(bgl)进行融合连接到p ET-28a(+)上;通过优化诱导表达条件,28℃、8 g/L乳糖诱导10 h,重组菌E.coli BL21/p ET-ff53-bgl发酵液上清中β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力达到1093 U/m L,与IPTG诱导的重组菌E.coli BL21/p ET-bgl(583 U/m L)相比,提高了0.87倍。本研究为高密度发酵制备该酶奠定了基础。
- 陈珊珊吴珊珊吴斌何冰芳
- 关键词：分泌表达大肠杆菌
- 基于常压室温等离子体技术诱变选育D-乳酸高发酵速率菌株被引量：4
- 2013年
- 为了提高D-乳酸的发酵产率,以选育获得的D-乳酸高产菌Sporolactobacillus sp.Y2-8为出发菌株,采用常压室温等离子体技术对其进行诱变。利用高糖-溴甲酚绿高通量筛选平板及摇瓶发酵复筛,最终筛选获得一株具有良好遗传稳定性的D-乳酸高发酵速率突变株Y90s-1,其D-乳酸发酵产率达1.05g(/L·h),比出发菌株提高了36.3%。
- 柏中中孙家夺吴斌
- 关键词：D-乳酸
- D-乳酸高产菌菊糖芽胞乳杆菌Y2-8磷酸果糖激酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达被引量：1
- 2014年
- 以D-乳酸高产菌菊糖芽胞乳杆菌Y2-8基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到960 bp的磷酸果糖激酶基因(pfk)。氨基酸序列比对分析表明,该磷酸果糖激酶(PFK)与其他乳酸菌PFK具有保守的底物结合位点,但是其变构效应物结合位点存在差异。将pfk基因克隆到表达载体pSE380上,获得重组菌E-pSE-pfk。进一步通过诱导条件的优化,重组菌的PFK比酶活达到4.89 U/mg,是优化前的4.79倍。采用低温诱导策略有助于实现菊糖芽胞乳杆菌pfk基因在大肠杆菌中可溶性表达。
- 郑璐柏中中许婷婷何冰芳
- 关键词：D-乳酸大肠杆菌
- Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究被引量：2
- 2012年
- [目的]系统研究Bacillus subtilis LC-9所产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质,探讨其在催化应用上的可行性。[方法]采用两步阴离子交换层析法对B.subtilis LC-9发酵液中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行纯化,用SDS-PAGE检测其纯度,研究纯酶的酶学性质及该酶对β-葡聚糖和地衣多糖的降解特性,并采用TLC法检测其水解液中糖的成分。[结果]从自行筛选的糖苷酶产生菌B.subtilis LC-9的发酵液中经两步纯化,得到电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,其比活力达3 502 U/mg,表观分子量为28 kDa;酶的最适反应pH和温度分别为6.5和45℃,且在45℃下稳定;该酶催化地衣多糖的Km值和Vmax分别为4.13 mg/ml和1 238μmol/min/mg,催化大麦β-葡聚糖的Km值和Vmax分别为3.84 mg/ml和1 427μmol/min/mg;该酶降解大麦β-葡聚糖产生寡聚糖,最终产物主要为三糖和四糖,而降解地衣多糖终产物主要为三糖。[结论]从Bacillus subtilis LC-9发酵液中纯化获得了电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,性质研究表明该酶是专一性的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,有望用于啤酒、饲料等领域。
- 刘娟娟吴斌何冰芳
- 关键词：Β-1,3-1,4-葡聚糖酶纯化酶学性质
