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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定: 2010年; 目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。; 王桂花周向梅尹晓敏杨利锋周海云张交儿刘爱林赵德明; 关键词：免疫胶体金免疫印迹

绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA转录水平研究被引量：1: 2009年; 本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系。选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA,反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水平进行Real-time(实时)荧光定量PCR检测。结果表明,大脑皮质中的受体表达水平最高(P<0.05),其次为心脏和脑干,中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏,表达量最低为肺脏(P<0.05)。结果提示,朊病毒受体——37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性,受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高。结果提示朊病毒入侵机体后,组织器官PrPSc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关。; 乔俊文苏晓鸥王伊琴周向梅杨建民尹晓敏马李颖赵德明; 关键词：REAL-TIME PCR MRNA 绵羊 PRPSC

犬鳞状细胞癌的病理组织学观察被引量：4: 2011年; 鳞状细胞癌是犬皮肤多发的一种棘细胞来源的恶性肿瘤,高居犬所发生恶性肿瘤的第二位,机体许多部位都可能出现。本试验对临床中遇到的一例造成严重损伤的犬后肢鳞状细胞癌进行了研究,并从组织病理学的角度加以了确诊。; 张珠明汪仁莉许立华赵德明; 关键词：鳞状细胞癌后肢

2009年实验用鼠健康状况的病理学调查和分析被引量：6: 2010年; 抽取10家单位的实验用鼠170只,均在4～6周龄,断颈处死后,采集心脏、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏,10%福尔马林固定后制成病理切片,运用显微镜观察各脏器的健康状况。结果表明绝大多数实验用鼠经病理学诊断为健康动物,而非健康动物以支气管肺炎和脂肪肝为主要病变,这可能与饲养的环境和饲喂的饲料有关,可通过加强饲养管理来改善。; 杨杨王进谭荣荣刘爱林尹晓敏; 关键词：病理学诊断

宁夏滩羊朊蛋白的免疫组化检测及其基因多态性分析: 本研究运用免疫组织化学技术,首次对我国一类保护物种宁夏滩羊各组织中朊蛋白(PrP)的分布进行了定性、定位研究,结果显示,PrP在滩羊的大脑、脑干、肝脏、脾脏、肾脏及淋巴结均有表达.对朊蛋白部分基因片段扩增后并进行测序,多...; 许立华张珠明周向梅赵德明; 关键词：滩羊朊蛋白免疫组化多态性; 文献传递

绵羊朊蛋白PrP^C51-216蛋白酶K抵抗片段的克隆原核表达及纯化: 2010年; 根据绵羊朊蛋白基因(prion protein nucleic acid,PrNP)序列,截去PrNP部分N端信号肽(150 bp)和C端GPI锚定位点(123 bp)形成PrNPT-08,设计特异性引物,以绵羊全血提取DNA为模板,扩增PrNPT-08序列。与表达载体pET30a(+)连接,转化入BL21(DE3)感受态细胞。用IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE电泳、纯化、Western blotting验证。结果表明,所插入的克隆片段含有498个核苷酸,共编码166个氨基酸,序列对比分析表明,与GenBank中绵羊朊蛋白基因序列同源性为99.6%,氨基酸序列同源性为98.8%。PrNP T-08基因在大肠杆菌得到高效表达,表达产物为相对分子量为27 kDa的融合蛋白,并能被PrP单克隆抗体AH6所识别。该蛋白成功表达为研究朊蛋白生理生化功能和结构转变提供了基础生物学材料,同时为朊蛋白疾病诊断中所需单克隆抗体的制备提供基本的试验材料。; 张奥余琦周向梅刘爱林赵德明; 关键词：绵羊朊蛋白基因克隆原核表达

猪传染性猪萎缩性鼻炎的研究进展被引量：7: 2009年; 传染性萎缩性鼻炎（Swine infectious atrophic rhinitis，AR）又称慢性萎缩性鼻炎或猪萎缩性鼻炎，主要是由支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchisepfica，Bb）和产毒素多杀巴氏杆菌（Toxigenic Pasteurella multocida，TPm）引起猪的一种多发的慢性呼吸道传染病。该病的主要特征为慢性鼻炎、颜面部变形和鼻甲骨萎缩。哺乳仔猪感染本病后，除引起鼻甲骨甚至鼻腔变形、萎缩或消失外，还可以引起全身钙代谢障碍，致使仔猪发育迟缓、饲料利用率降低，有时伴发急、慢性支气管炎，导致仔猪死亡。; 盛圆贤赵德明; 关键词：传染性萎缩性鼻炎慢性呼吸道传染病支气管败血波氏杆菌多杀巴氏杆菌钙代谢障碍

2010年实验用鼠健康状况的病理学调查和分析被引量：8: 2011年; 应用石蜡切片及H.E染色法,于2010年5月和10月分别对10家和14家实验动物单位的4～6周龄实验用鼠的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行组织学观察。结果显示,绝大多数的实验用鼠为健康动物,而非健康动物以脂肪肝和轻度肺炎为主要病变,且发病率稳定。这可能与饲养的环境和饲料有关,加强饲养管理可以使这种情况得到改善。; 丁天健王进甘文强林敬钧张晓立赵炜吴文玉张思明尹菲鲁云李星寓王敏姜秋月何柳周向梅杨利峰尹晓敏赵德明; 关键词：病理学诊断

朊蛋白在宁夏滩羊不同组织中表达的免疫组化研究: 2010年; 作者运用免疫组织化学技术,首次对我国一类保护物种宁夏滩羊各组织中朊蛋白(PrP)的分布进行定性、定位研究。结果显示,PrP在滩羊的大脑、脑干、小脑、心脏、肝脏、脾脏、肾脏及淋巴结均有表达,尤其在脾脏、肾脏、脑干、淋巴结中的表达量丰富,而肺脏检测结果为阴性。此研究确定了朊蛋白在滩羊各组织中的表达与分布状况,并优化了朊蛋白检测的技术条件,为羊痒病的诊断与检测提供技术支持。; 许立华康晓东涂健张珠明杨建民周向梅尹晓敏杨利峰赵德明; 关键词：朊蛋白免疫组化滩羊

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国家级星火计划(2006EA125015)