国家重点基础研究发展计划(2009C13118900)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 相关作者：郭巍王立光孙永祥孙伟明刘廷辉更多>>
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- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 对粉纹夜蛾高毒力cry9Ea基因的克隆及表达被引量：5
- 2010年
- 【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因,并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130kDa的蛋白,再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC50为0.044μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。
- 孙永祥刘廷辉郭巍王立光孙伟明
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达杀虫活性
