国家自然科学基金(30872187)
- 作品数：9 被引量：22H指数：4
- 相关作者：曹峻岭陈静宏杨占田杨亚娟曹珮华更多>>
- 相关机构：西安交通大学西安医学院西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
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- 组织工程修复软骨基质蛋白聚糖代谢的初步探讨
- 2010年
- 目的检测软骨修复组织中蛋白聚糖相关代谢指标,初步探讨在软骨修复过程中基质蛋白聚糖的代谢变化以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和蛋白聚糖酶(aggrcanases)的作用。方法松质骨骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)复合同种异体软骨细胞构建组织工程化软骨,体内植入修复兔膝关节骨软骨缺损。术后6个月取材检测蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)、MMPs、MMPs裂解表位BC-4以及aggrcanases裂解表位BC-13的表达情况。结果在修复组织中,蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)表达增加,MMPs及其裂解表位BC-4表达减低,而aggrcanases裂解表位BC-13表达阴性。结论利用蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)、MMPs、BC-4、BC-13的表达情况可以初步了解修复软骨组织中蛋白聚糖的代谢变化,修复软骨组织蛋白聚糖的合成大于分解,MMPs在兔关节修复软骨基质蛋白聚糖的基础代谢和重塑中具有重要作用。
- 杨波曹峻岭张安陈静宏张增铁付强刘富强陆敏灵刘家远
- 关键词：软骨基质蛋白聚糖基质代谢
- NIV毒素和硒对软骨细胞IL-1β、TNF-α分泌的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:通过测定NIV毒素和硒作用下软骨细胞IL-1β、TNF-α含量的变化,从细胞因子角度探讨大骨节病发病机制。方法:在体外单层和立体培养的人胚软骨细胞中加入NIV毒素和硒,构建软骨损伤模型,收集软骨组织、细胞和细胞培养液,用光学显微镜观察体外构建组织的形态;用分光光度法测定软骨细胞DNA含量;用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测细胞培养液中IL-1β、TNF-α的水平。结果:形态学观察发现NIV毒素能抑制软骨细胞生长,局部出现点片状坏死;毒素加硒后,上述损伤变化减弱。NIV毒素作用下软骨细胞DNA的合成受到抑制,但培养液中IL-1β、TNF-α含量显著升高,毒素加硒与毒素组变化趋势一致,但数值略下降。结论:NIV毒素能诱导软骨细胞IL-1β与TNF-α的分泌,这可能是造成软骨细胞损伤的原因之一。
- 曹珮华曹峻岭曹励民杨亚娟李蔚勃
- 关键词：硒IL-1ΒTNF-Α大骨节病
- 核心蛋白聚糖表达减少与大骨节病软骨坏死的相关性研究被引量：2
- 2016年
- 目的 观察大骨节病（KBD）儿童手指关节软骨和低硒条件下T-2毒素中毒大鼠膝关节软骨核心蛋白聚糖（Decorin）的表达,以及T-2毒素和硒对培养软骨细胞Decorin表达的影响,分析Decorin与KBD软骨坏死的相关性.方法 以5例尸检KBD儿童（KBD组）和5例因车祸死亡或畸形手术儿童（对照组）手指关节软骨为研究对象,采用免疫组织化学染色法检测儿童手指关节软骨Decorin的表达情况.选取雄性健康SD大鼠32只,按体质量采用随机数字表法分为常规组、低硒组,每组16只,常规组饲料硒含量为101.5 μg/kg,低硒组饲料硒含量为1.1 μg/kg,30 d后常规组又分为常规组和常规＋T-2组,低硒组分为低硒组和低硒＋T-2组,每组8只,T-2毒素（100 μg/kg,每日2次）采取灌胃饲养,30 d后处死大鼠,取左侧膝关节,用免疫组织化学染色方法检测大鼠关节软骨细胞Decorin表达.体外培养人软骨细胞系C28/I2细胞,加入不同浓度的T-2毒素（0、1、6、12 μg/L）和硒（0、0.1 rmg/L）作用72 h,采用实时荧光定量PCR法检测Decorin mRNA表达.结果 KBD组儿童手指关节软骨表、中、深层Decorin阳性软骨细胞密度[（1.75土0.95）％、（8.92±3.45）％、（0.00±0.00）％]均低于对照组[（21.27±3.44）％、（78.70±8.82）％、（93.12±6.99）％,t=11.76、12.87、31.09,P均＜0.05].低硒＋T-2组大鼠膝关节软骨Decorin表达阳性率[（19.33±2.82）％]明显低于常规组、低硒组及常规＋T-2组[（62.67±5.33）％、（53.17±2.41）％、（34.50±2.64）％,P均＜0.05].在硒为0 mg/L时,6、12 μg/L T-2毒素作用下软骨细胞Decorin mRNA表达（0.38±0.01、0.26±0.03）明显低于0μg/L T-2毒素（对照）组（1.00±0.00,P均＜0.05）.在硒为0.1 mg/L时,0、6、12 μg/L T-2毒素作用下软骨细胞Decorin mRNA表达（1.53±0.06、1.92±0.04、2.50±0.01）高于相同剂量单纯T-2毒素组（1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00,P均＜0.05）.结论 KBD儿童和低硒�
- 王梦莹陈静宏刘慧中王伟王治伦杨占田杨浩杰薛森海
- 关键词：大骨节病核心蛋白聚糖T-2毒素
- Effects of Deoxynivalenol,Nivalenol,T-2 Toxin and Selenium on the Metabolism of Tissue Engineered Cartilage In Vitro
- ＜正＞Introduction Kashin-Beck Disease（KBD） is an endemic,chronic, degenerative osteoarthropathy,which is manifes...
- Clare E.HughesBruce Caterson
- 文献传递
- 关节软骨损伤修复机制研究进展
- 2010年
- 关节软骨损伤后自身修复能力有限,而现有各种治疗方法存在着很多问题,通过对关节软骨修复机制的研究可以寻求到更理想的治疗方法。现从关节软骨的结构和功能、组织工程修复及修复过程中相关生物大分子的作用等方面简述国内外在研究关节软骨损伤修复机制领域的进展,并提出软骨修复机制研究中存在和需要解决的问题。
- 刘家远李锦王淑梅曹峻岭
- 关键词：关节软骨生物大分子
- 基质金属蛋白酶与大骨节病的相关性研究被引量：4
- 2014年
- 目的：观察基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases，MMPs）在大骨节病（Kashin-Beck disease， KBD）儿童软骨和低硒条件下T-2毒素中毒大鼠软骨中的表达，以及T-2毒素对软骨细胞MMP-13启动子的激活作用，探讨MMPs与KBD发病的关系。方法以5例尸检KBD儿童（KBD组）和5例因车祸死亡或畸形手术的正常儿童（对照组）手指节软骨为研究对象，采用免疫组织化学染色的方法，检测软骨中MMP-1和MMP-13的表达。雄性健康SD大鼠32只，按体质量采用随机数字表法分为常规饲料组、低硒饲料组，每组各16只。常规饲料硒含量为101.500μg/kg，低硒饲料硒含量为1.118μg/kg。大鼠低硒动物模型建造成功后，常规饲料组分为常规组和常规＋T-2组，低硒饲料组分为低硒组和低硒＋T-2组，每组8只。 T-2毒素（100μg·kg-1·d-1）灌胃饲养，30 d后处死大鼠，取左侧膝关节，用免疫组织化学染色方法检测大鼠关节软骨细胞MMP-1和MMP-13的表达水平。体外培养人软骨细胞系C28/I2细胞，分成空载体组、MMP-13启动子载体组、MMP-13启动子载体＋T-2毒素20μg/L组、MMP-13启动子载体＋T-2毒素40μg/L组，将-1602/＋20-MMP13-Luc启动子重组荧光素酶报导质粒以及空载体瞬时转染C28/I2细胞，24 h后，加入20μg/L和40μg/L T-2毒素，继续培养24 h，用荧光素酶报告基因检测T-2毒素对MMP-13启动子的作用。结果 KBD组儿童关节软骨表层和中层MMP-1表达阳性率[（29.73±10.12）%、（28.27±0.91）%]均高于对照组[（2.47±0.11）%、（0.00±0.00）%，P均〈0.05]，KBD组儿童关节软骨表层和中层 MMP-13表达阳性率[（13.21±4.32）%、（41.85±6.32）%]明显高于对照组[（5.72±0.31）%、（0.00±0.00）%，P均〈0.05]。低硒＋T-2毒素组大鼠关节软骨MMP-13在表层和中层表达水平[（13.21±4.32）%、61.85±8.68）%]明显高于常规组和低硒组[（2.43±0.22）%、（5.89±0.69）%，（3.03±0.29）
- 陈静宏曹峻岭王治伦马天有王梦莹何颖杨占田陈晨
- 关键词：大骨节病基质金属蛋白酶T-2毒素硒
- 大骨节病儿童软骨白细胞介素-1β、白细胞介素-6及肿瘤坏死因子-α的表达被引量：6
- 2014年
- 目的：通过检测大骨节病儿童软骨细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，探讨细胞因子与大骨节病（KBD）之间的关系。方法5例KBD儿童（KBD组）手指软骨组织来自西安交通大学医学院地方病研究所保存的大骨节病患儿尸检样本；5例正常儿童（对照组）手指软骨组织来自陕西省西安市非KBD病区，其中3例来自车祸死亡儿童，2例为先天6指畸形手术标本。采用免疫组织化学染色的方法，分别检测软骨中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达；并将关节软骨细胞分层（表层、中层、深层），分析软骨各层中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果 KBD组关节软骨表层、中层、深层IL-1β阳性软骨细胞密度（63.50±7.19、54.75±5.50、66.20±9.91）均高于对照组（5.75±1.26、0.00±0.00、0.00±0.00，P均〈0.05）；KBD组关节软骨表层IL-6阳性软骨细胞密度（55.25±6.24）高于对照组（0.00±0.00，P〈0.05）；KBD组关节软骨表层、中层、深层TNF-α阳性软骨细胞密度（33.25±6.50、3.75±0.96、29.80±1.92）均高于对照组（3.74±0.82、0.00±0.00、0.00±0.00，P均〈0.05）。结论 KBD儿童软骨细胞中IL-1β，IL-6和TNF-α表达显著升高，细胞因子的过量表达可能参与KBD软骨细胞死亡与软骨破坏过程。
- 陈晨陈静宏曹峻岭王伟张增铁杨占田于伯泉马天有
- 关键词：大骨节病软骨白细胞介素-1Β白细胞介素-6肿瘤坏死因子-Α
- T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖酶的影响被引量：3
- 2012年
- 目的 研究T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖代谢的影响.方法 体外培养胎儿软骨细胞,根据施加的实验措施将其分为8组,对照组（T-2毒素：0 mg/L,硒：0 mg/L）、1、10、20μg/L T-2毒素组、加硒（0.1mg/L）组、1、10、20 μg/L T-2毒素加硒（0.1 mg/L）组,每组设3个平行样.在T-2毒素和（或）硒作用5d后,采用免疫蛋白印迹法检测软骨细胞蛋白聚糖的蛋白表达水平,用RT-PCR方法检测软骨细胞蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平.结果 硒、T-2毒素对蛋白聚糖的蛋白表达量、蛋白聚糖酶-1 mRNA表达水平、蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平有影响（F=0.294、27.71,107.45、362.25,34.68、22.26,P均＜0.05）,硒与T-2毒素存在交互作用（F=79.99、230.76、388.33,P均＜0.05）,表现为拮抗作用.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖的蛋白表达（0.278±0.015、0.235±0.029、0.195±0.028）均低于0 mg/L的T-2毒素组（0.472±0.0358,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖的蛋白表达（0.399±0.028、0.299±0.020、0.263±0.019）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.197±0.018,P均＜0.05）.在T-2毒素分别为1、10、20μg/L时,0.1 mg/L硒组的蛋白聚糖的蛋白表达均高于0 mg/L硒组（P均＜ 0.05）.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-1 mRNA表达（0.535±0.033、1.071±0.043、1.454±0.058）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.481±0.023,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-1 mRNA表达（1.057±0.048、0.555±0.036、0.902±0.045）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.346±0.020,P均＜0.05）.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-2 mRNA表达（0.596±0.038、0.656±0.033、0.949±0.049）均高于0 mg/L的T-2毒素组（0.387±0.020,P均＜0.05）；在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-2 mRNA表达（0.600±0
- 于伯泉曹峻岭陈静宏师钟丽王伟杨占田马天有王世捷
- 关键词：硒软骨细胞大骨节病T-2毒素
- NIV毒素和硒对软骨细胞CD_(44)代谢的影响被引量：1
- 2011年
- 目的进一步探讨大骨节病(KBD)的发病机制。方法取4月龄引产胎儿软骨细胞原代分离、培养并随机分为四组。对照组不处理,加硒组加入硒浓度为0.1 mg/L,雪腐镰刀菌烯醇毒素(NIV)组加入NIV毒素使终质量浓度为0.1 mg/L,联合组加硒和NIV毒素,浓度同上。RT-PCR法检测各组CD44 mRNA在软骨细胞中的表达;流式细胞仪检测各组软骨细胞表面CD44蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞培养液中可溶性CD44(sCD44)水平。结果 NIV组、联合组软骨细胞CD44 mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组和加硒组(P均<0.05)。与NIV组比较,联合组CD44表达有所降低,但不明显。NIV组细胞培养液中溶解的sCD44水平最高,其次为联合组,对照组水平最低。结论 NIV毒素和硒能影响软骨细胞CD44的代谢,这可能是造成软骨细胞损伤的机制。
- 曹珮华曹峻岭曹励民杨亚娟李蔚勃
- 关键词：软骨细胞硒CD44大骨节病
- 雪腐镰刀菌烯醇对培养软骨细胞蛋白聚糖合成的影响被引量：8
- 2010年
- 背景：雪腐镰刀菌烯醇是真菌毒素之一,它可能与大骨节病的发生具有一定的相关性。目的：验证雪腐镰刀菌烯醇对软骨细胞蛋白聚糖合成的影响。方法：在体外单层培养的人胚软骨细胞中加入不同质量浓度（0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6mg/L）的雪腐镰刀菌烯醇毒素,作用1~5d后收集软骨细胞,用MTT法检测软骨细胞存活率;用紫外分光光度法检测细胞DNA含量,RT-PCR方法检测蛋白聚糖mRNA表达;用Westernblot法检测人软骨细胞蛋白聚糖表达。结果与结论：0.025mg/L雪腐镰刀菌烯醇毒素可刺激软骨细胞生长,其刺激作用呈先升高后降低的趋势。0.05~0.1mg/L毒素作用早期的细胞存活率增加,随后细胞生长被毒素抑制。当毒素质量浓度升高至0.2mg/L以上时,随着雪腐镰刀菌烯醇毒素质量浓度的增加及作用时间延长,细胞存活率明显下降。0.1~0.5mg/L雪腐镰刀菌烯醇毒素可以抑制软骨细胞蛋白聚糖的合成及其mRNA表达。结果表明雪腐镰刀菌烯醇毒素对软骨细胞蛋白聚糖合成有明显的抑制作用,并以剂量和时间依赖性方式影响细胞的增殖。
- 曹珮华曹峻岭陈静宏杨亚娟
- 关键词：大骨节病蛋白聚糖软骨组织工程
