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人Toll样受体-9胞外区N端蛋白的表达及其抗体的制备: 2005年; 目的: 构建人Toll 样受体-9(hTLR-9)基因5′端序列的表达质粒,在大肠杆菌中表达,并以表达的hTLR-9-N免疫小鼠制备抗体.方法: 构建 hTLR-9 基因5′端(707～1 167 bp)的硫氧还蛋白(thioredoxin)融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N.将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L IPTG诱导下表达.表达产物用SDS-PAGE 进行鉴定.以8 mol/L 尿素溶解的包涵体作为免疫原,免疫昆明种小鼠制备抗hTLR-9-N的抗体.结果:融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N在E.coli BL21 (DE3)中以相对分子质量(Mr)为31 000的包涵体形式表达;Western blot分析证明hTLR-9-N在大肠杆菌中得到正确表达.表达的目的蛋白初步纯化后的纯度达90%以上;以hTLR-9-N为抗原制备的抗血清效价为1∶25 600; 该抗血清可以与转染后稳定表达全长hTLR-9的HEK293细胞产生结合反应.结论:成功地在大肠杆菌中表达hTLR-9 N末端蛋白,制备的抗hTLR-9-N抗体可特异性结合表达全长hTLR-9的真核细胞.; 李军赵文忠江海燕朱平富宁; 关键词：原核表达多克隆抗体

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导P815细胞脱颗粒的影响: 2006年; 目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体(TSP-2)对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。方法用RT-PCR、免疫组化检测了小鼠肥大细胞瘤P815细胞在mRNA水平的表达及膜表面TLR2与抗体TSP-2的结合;利用激光共聚焦显微镜观察小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。结果P815细胞在mRNA水平以及膜表面均有TLR2表达,抗体TSP-2能有效抑制C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒反应所致的形态学改变与钙流出。结论抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2可与P815细胞膜表面TLR2结合,并能抑制C48/80诱导的P815肥大瘤细胞脱颗粒。; 杨翠兰郑健罗冰刘艳君富宁; 关键词：抗体脱颗粒

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究被引量：2: 2004年; 目的观察抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体对小鼠肉瘤S180生长的影响。方法在对小鼠Toll样受体2(mTLR-2)B细胞优势表位预测的基础上,合成B细胞识别表位20mer短肽,将其与载体蛋白偶联,制备免疫原。所得兔抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位多克隆抗体TSP-1纯化后,采用Westernblotting、免疫组织化学和流式细胞仪进行初步鉴定。小鼠肉瘤株S180细胞注射小鼠左后肢,其中实验组混合100μg纯化抗体TSP-1,无关免疫球蛋白对照组混合100μg正常兔IgG,空白对照组仅接种S180。小鼠经麻醉分别于10、14、18d处死,称量瘤质量并计算抑瘤率。结果Westernblotting显示在相对分子质量约95000处可见清晰的反应条带;免疫组织化学和流式细胞术检测显示抗体可与表达天然mTLR-2的J774A.1细胞反应;实验组小鼠肉瘤生长明显受到抑制,其瘤质量在10、14、18d与对照组相比差异显著(P<0.05);抑瘤率分别为77%、51%和53%。结论局部应用抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位抗体可抑制小鼠肉瘤S180生长,且表现在肿瘤生长的早期。; 赵文忠刘艳君朱平刘洁韩强涛富宁; 关键词：抗体肿瘤

人Toll-like receptor 2配基模拟肽的初步研究被引量：4: 2005年; TLR-2(Toll-likereceptor2)是介导天然免疫的重要模式识别分子,可参与识别多种病原体及其产物.为探索被TLR-2所识别配基的结构共性,以真核细胞表达的人TLR-2胞外段蛋白(A26￣T588)为钓饵筛选噬菌体12肽库,获得一高度保守的阳性噬菌体克隆P12-1,实验发现P12-1可与不同形式的TLR-2胞外段结合,并且可刺激细胞分泌TNFα,提示P12-1可能模拟TLR-2配基的结构与生物学活性.; 刘艳君罗海波朱平富宁; 关键词：TLR-2 噬菌体肽库模拟肽表位

人Toll-like receptor 2胞外段的克隆和表达被引量：4: 2003年; 目的克隆、表达人Toll-like receptor2(TLR2)胞外段(A26-T588)基因,获得人TLR2胞外段蛋白。方法 RT-PCR扩增TLR2胞外段基因,以pcDNA3.1+质粒为载体在HEK293细胞中表达TLR2胞外段蛋白,同时以pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)重组质粒免疫昆明鼠,制备抗TLR2胞外段蛋白多抗。结果 PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒,SDS-PAGE分析纯化产物在M_r为68000处出现明显蛋白条带。重组质粒DNA免疫小鼠3次后,血清抗体滴度可达1∶250。TLR2胞外段蛋白可与LPS结合,并在一定的质量浓度范围内呈剂量依赖性。结论构建的pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒可在哺乳动物细胞中表达TLR2胞外段蛋白,并与重组质粒DNA免疫小鼠抗血清及TLR2单克隆抗体TL2.1特异性反应,由此证明其表达正确。; 刘艳君朱平韩强涛富宁; 关键词：TOLL-LIKE RECEPTOR 多克隆抗体

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国家自然科学基金(30070719)