国家自然科学基金(30200085)
- 作品数：8 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：四川大学华西医院三六三医院北京市大兴区人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成肌细胞与雪旺细胞混合移植治疗肌营养不良的初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的观察成肌细胞与雪旺细胞局部混合移植治疗Duchenne型肌营养不良症(DMD)模型鼠(mdx鼠)后抗肌萎缩蛋白(dys)的表达及成肌细胞与宿主的融合情况。方法成肌细胞和雪旺细胞培养、纯化、鉴定后,将其按比例(10:1)混合注射到mdx鼠的左侧腓肠肌内(混合移植组),同时设单纯移植组(仅注射成肌细胞),两组右侧腓肠肌均注射DF培养基作为对照。细胞移植后1月取腓肠肌进行免疫荧光染色,观察骨骼肌dys表达情况。结果混合移植组左侧腓肠肌dys的积分光密度(IOD)值(6342429.4167±925414.20068)高于单纯移植组(5295615.7500±1243283.86373,P<0.05),而且两组左侧腓肠肌dys的IOD值均比同组右侧腓肠肌高(P<0.05)。结论成肌细胞雪旺细胞混合移植可提高成肌细胞移植后的融合性。
- 罗丽周红雨
- 关键词：成肌细胞雪旺细胞抗肌萎缩蛋白
- 成肌细胞的临床应用现状及前景被引量：9
- 2007年
- 目的介绍成肌细胞在临床常见疾病细胞治疗和基因治疗中的研究现状、前景和存在的问题。方法查阅国内外近15年来对Duchenne型肌营养不良、帕金森病、脊髓疾病、永久性面瘫、心血管系统疾病、骨、关节及肌肉损伤、血液系统疾病以及垂体性侏儒等的细胞治疗及基因治疗文献,并进行综合分析。结果成肌细胞移植是治疗多种常见疾病较为理想的方法,在医学领域中的应用取得了一定进展,但也存在免疫排斥及成肌细胞移植最佳载体的选择等问题。结论利用成肌细胞为载体携带外源基因,治疗临床常见疾病是目前研究的重点和热点,存在的主要问题是移植免疫、成肌细胞融合率以及目标蛋白的表达。成肌细胞来源和取材容易,易于在体外培养,便于回输给宿主,这些优点利于其在临床诸多领域的中应用。
- 刘立斌周红雨
- 关键词：成肌细胞基因治疗神经系统疾病心血管系统疾病血液系统疾病
- 成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)的效果,探讨基因治疗DMD的方法及可行性。方法用多步酶消化法与差速贴壁法培养C57/BL10小鼠成肌细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态。取第4代细胞用5-BrdU标记。将24只DMD模型鼠——mdx小鼠(4～6周龄,雄性,体重13.8～24.6g)随机分为两组(n=12),A组经尾静脉分2次(间隔2周)注射1×106个/mL标记后成肌细胞,B组同法注射1mLDMEM/F12培养基为对照。术后4周采用一次性游泳力竭实验检测小鼠运动能力,处死后取材行HE染色及5-BrdU、结蛋白、抗肌萎缩蛋白(dystrophin,Dys)免疫组织化学染色观察,并行图像分析。结果原代成肌细胞培养5～7d后即可传代,可获得稳定传代及足量的细胞。A组小鼠一次性游泳力竭时间为(60.72±5.76)min,B组为(47.77±5.40)min,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。术后4周HE染色示A组可见变成圆形且透明染色的肌细胞,肌纤维细胞核中心移位(centrally nucleated fibers,CNF)比例为67%;B组肌纤维粗细不等,可见肥大、萎缩、变性和肌纤维坏死等改变,CNF比例>80%。免疫组织化学染色示,A组5-BrdU、结蛋白、Dys表达均呈阳性,B组少见表达或呈阴性表达。图像分析结果显示,A、B组结蛋白积分吸光度(IA)值分别为489.70±451.83和71.15±61.14,阳性面积占视野总面积的比值分别为0.3143±0.1973和0.1028±0.0628(P<0.05);DysIA值分别为5424.64±2658.01和902.12±593.51(P>0.05),阳性面积占视野总面积的比值分别为0.3237±0.1177和0.0352±0.0329(P<0.05)。结论成肌细胞移植治疗小鼠DMD有一定的治疗作用。
- 刘立斌周红雨
- 关键词：成肌细胞假肥大型肌营养不良症基因治疗
- 单核细胞趋化蛋白1体外趋化经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的为提高BMSCs的静脉移植效率,研究单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs的体外趋化迁移作用。方法以差速贴壁法与密度梯度离心法相结合分离培养C57/BL10小鼠BMSCs,并采用ALP Gomori改良钙钴法染色行成骨诱导鉴定。取第3代BMSCs以5氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)为诱导剂进行成肌细胞诱导分化。以不同浓度(25、50、100、200、400ng/mL)的MCP-1对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs进行体外趋化迁移,计数迁移细胞数,以单纯L-DMEM培养基为对照;应用流式细胞仪检测经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs的C-C趋化因子受体(chemokine receptor2,CKR-2)的表达。结果第3代细胞能诱导分化为成骨细胞,提示所用细胞为BMSCs。经成肌诱导分化后的BMSCs可形成肌小管结构。MCP-1浓度为25、50、100、200、400ng/mL时,迁移至Millicell小室聚碳酸酯膜外层的细胞数分别为(35.0667±6.5842)、(43.2000±6.4608)、(44.4667±4.8235)、(45.6000±8.6503)、(50.7333±7.5825)个,与对照组(28.3333±8.9176)个比较差异均有统计学意义(P<0.05),25、50、400ng/mL组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,加入一抗和二抗的待测样本CKR-2表达率为48.0%,与空白对照(0.6%)和仅加入二抗的阴性对照(17.0%)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 MCP-1对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs有趋化迁移作用,MCP-1/CKR-2通路参与了小鼠BMSCs的迁移。
- 刘举周红雨刘立斌罗丽连志云李慧英
- 关键词：BMSCS单核细胞趋化蛋白1小鼠
- 基因治疗假肥大型肌营养不良被引量：3
- 2007年
- 刘立斌周红雨
- 关键词：假肥大型肌营养不良基因治疗抗肌萎缩蛋白进行性肌营养不良隐性遗传疾病人骨骼肌
- 桶人综合征
- 2006年
- 刘立斌周红雨
- 关键词：综合征脑灌注不足上肢瘫痪相关病例SAGE双下肢瘫痪
- 卒中患者床旁吞咽评估研究被引量：11
- 2009年
- 目的：探索可靠的卒中患者床旁吞咽评估方法。方法：61例住院卒中患者均进行各种床旁吞咽评估筛查及电视透视检查，以后者为金标准探讨各方法的敏感度、特异度及阳性、阴性预测值。结果：六种独立床旁吞咽评估方法与金标准相比较的敏感度在60％～87％之间，特异度在76％～89Yo之间，阳性预测值在50％～69％之间，阴性预测值在86％～95％之间；几种评估方法作为平行试验联合应用时的敏感度在89％～98％之间，阴性预测值在94％～99％之间；几种方法作为序列试验应用时的特异度在97％～99％之间，阳性预测值在82％～90％之间。结论：根据不同方法的预测特点，可得到针对不同患者的、有效的床旁评估方法。床旁吞咽评估简单、有效、便捷，是临床工作中适宜的评估方法。
- 袁强周红雨
- 关键词：卒中吞咽困难误吸
- 抗肌萎缩蛋白微基因转染C57/BL10小鼠成肌细胞的实验研究
- 2010年
- 目的研究抗肌萎缩蛋白微基因(micro-dystrophin)体外转染成肌细胞后的表达,探讨成肌细胞移植联合基因治疗Duchenne型肌营养不良症的可行性。方法制备感受态大肠杆菌JM109,将pSL139质粒转化感受态大肠杆菌,挑取阳性克隆菌落,培养过夜后按碱裂解法提取质粒,并用PvuⅠ和ClaⅠ双酶切后琼脂糖凝胶电泳。取5～7天龄C57/BL10雄性小鼠10只,体重4～5g,采用多步酶消化与差速贴壁法行成肌细胞原代和传代培养,采用结蛋白(Des-min)免疫荧光检测鉴定。以pSL139质粒转染第3代成肌细胞为实验组,未转染为对照组。转染48h后行RT-PCR检测和细胞免疫荧光检测两组成肌细胞内micro-dystrophinmRNA和蛋白的表达,并计算转染效率。结果 pSL139质粒酶切后琼脂糖凝胶电泳40min,即观察到3.75kb的目的基因和载体部分。倒置相差显微镜观察示,培养24～48h后细胞完全贴壁,形态为三角形或菱形,大小基本一致;4～6d后细胞生长至融合,可以传代。第2代成肌细胞爬片经Desmin免疫荧光检测,多数细胞胞浆可见绿色荧光,纯度在90%以上。pSL139质粒转染成肌细胞48h后,RT-PCR检测示实验组和对照组成肌细胞cDNA在300bp左右均出现条带,且实验组条带亮度高于对照组。细胞免疫荧光检测显示实验组部分成肌细胞胞浆中有绿色荧光,micro-dystrophin阳性细胞表达效率为45%～55%,对照组成肌细胞胞浆中无绿色荧光。结论脂质体能介导pSL139质粒转染成肌细胞并在其胞浆中转录和表达。
- 李惠英周红雨
- 关键词：成肌细胞转染细胞移植小鼠
