国家自然科学基金(30871168)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：中南大学湘雅二医院广西中医学院附属瑞康医院中南大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 尿酸氧化酶与肌酐水解酶融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2013年
- 目的构建含尿酸氧化酶与肌酐水解酶融合基因的质粒并转化大肠杆菌,使其能同时分泌该两种酶分解尿酸及肌酐。方法根据GenBank数据库已知的尿酸氧化酶基因设计引物,扩增到去掉终止密码子的尿酸氧化酶基因中,并使其连接到质粒pGM36e上构建成pGM36e-U,然后根据已知肌酐水解酶基因设计引物扩增肌酐水解酶基因,把其连接到质粒pGM36e-U中尿酸氧化酶基因后构建成重组质粒pGM36e-U/C,转化大肠杆菌,筛选鉴定重组大肠杆菌,并进行SDS-PAGE分析。将工程菌于特定浓度肌酐和尿酸的培养基中培养24 h,取培养液测定肌酐和尿酸浓度。结果重组质粒得到大小约1.68 kb基因片段。为尿酸氧化酶及肌酐水解酶之合。转化大肠杆菌后尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性得到表达。肌酐分解率提高43.50%,尿酸分解率提高42.32%。结论构建的含复合基因的重组质粒转化大肠杆菌后能表达尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性。分解尿酸和肌酐。
- 程新刘芳张彦新蒋云生
- 关键词：基因克隆基因工程菌尿酸氧化酶融合基因
- 高产尿酸氧化酶乳酸工程菌的构建
- 2015年
- 目的 将尿酸氧化酶基因克隆到乳酸乳球菌（Llactis）NZ9000中,使之能启动nisA放大系统增加尿酸氧化酶活性,构建一株高效分解尿酸的基因工程菌.方法 根据GenBank上已知的产朊假丝酵母菌尿酸氧化酶基因序列（Uricase,E12709）设计引物,PCR扩增尿酸氧化酶基因片段,将其克隆入质粒PNZ8048、PMG36e,构建重组质粒PNZ8048-U、PMG36e-U,重组质粒电转化L.lactis NZ9000构建基因工程菌L.lactis NZ9000-PNZ8048-U、L.lactis NZ9000-PMG36e-U,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定重组菌体裂解液中的尿酸氧化酶,测定尿酸氧化酶的活性和在高尿酸患者血清中降解尿酸的能力.结果 构建的重组质粒PNZ8048-U、PMG36e-U经酶切和测序显示,尿酸氧化酶基因片段长度为0.9 kb,基因片段序列与GenBank上尿酸氧化酶基因序列完全一致.构建重组基因工二程菌L.lactis NZ9000-PNZ8048-U、L.lactis NZ9000-PMG36e-U,均表达相对分子质量约为34 000的重组蛋白,与从尿酸氧化酶基因序列推测的303个氨基酸的理论分子量相符.体外测定菌酶液活性,L.lactis NZ9000-PNZ8048-U组酶活性为（1.92±0.14）u/ml,产朊假丝酵母菌组酶活性为（0.55±0.05）u/ml,L.lactis NZ9000-PMG36e-U组酶活性为（0.29±0.06） u/ml.高尿酸血症患者血清培养结果显示加入生理盐水的对照组尿酸值（620.0±58.7） μmol/L,L.lactis NZ9000-PNZ8048-U组（321.0±46.2） μmol/L,L.lactis NZ9000-PMG36e-U组（568.0±47.3）μmol/L,产朊假丝酵母菌组（406.0±42.4）μmol/L,其他3组与对照组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 成功构建基因工程菌L.lactis NZ9000-PNZ8048-U,重组菌酶活性较基因来源菌产朊假丝酵母菌高,并可高效分解高尿酸患者血清中的尿酸.
- 张彦新曾雪芳刘芳蒋云生
- 关键词：乳酸乳球菌尿酸氧化酶质粒
- 食品级高产尿酸氧化酶基因工程菌的构建
- 尿酸氧化酶是生物体内嘌呤代谢途径的一种重要酶,能催化尿酸氧化为尿囊素.许多物种中均发现有尿酸氧化酶可以将尿酸分解而排出体外,但在人和灵长类动物体内缺乏有活性的尿酸氧化酶,而以尿酸作为嘌呤代谢的终产物.血液中过多累积如慢性...
- 张彦新蒋云生
- 关键词：尿酸氧化酶基因克隆乳酸乳球菌
- 文献传递
