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国家自然科学基金(30871160)

作品数：11 被引量：30H指数：4
相关作者：沈薇陈娟张琴彭俊程文会更多>>
相关机构：重庆医科大学附属第二医院凉山州第一人民医院更多>>
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相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 8篇细胞
  • 6篇脂肪
  • 5篇蛋白
  • 5篇乙型肝炎病毒
  • 5篇脂肪变
  • 5篇脂肪变性
  • 5篇肝细胞
  • 5篇肝细胞脂肪变
  • 5篇肝细胞脂肪变...
  • 5篇肝炎病毒
  • 5篇病毒
  • 4篇代谢
  • 4篇乙型肝炎病毒...
  • 4篇基因
  • 3篇乙肝
  • 3篇乙肝病毒
  • 3篇乙型
  • 3篇脂代谢
  • 3篇肝病
  • 3篇RNA干扰

机构

  • 11篇重庆医科大学...
  • 3篇凉山州第一人...

作者

  • 11篇沈薇
  • 3篇彭俊
  • 3篇陈娟
  • 3篇张琴
  • 2篇熊玲
  • 2篇郑黎黎
  • 2篇程文会
  • 1篇任红
  • 1篇俞慧宏
  • 1篇杨梅
  • 1篇曾贵利
  • 1篇胡文艳
  • 1篇吴进峰
  • 1篇唐开福
  • 1篇田绿
  • 1篇李璇
  • 1篇郭进军
  • 1篇李小平

传媒

  • 3篇中国生物制品...
  • 3篇第三军医大学...
  • 3篇中华肝脏病杂...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇第二军医大学...

年份

  • 5篇2012
  • 3篇2011
  • 2篇2010
  • 1篇2009
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A被引量：1
2009年
目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。
吴进峰曾贵利沈薇杨梅王峰田绿李璇胡文艳李小平任红唐开福
关键词：DNA损伤主要组织相容性复合物脱氧胞苷
乙型肝炎病毒X蛋白对HepG2细胞脂代谢相关基因表达的影响被引量：3
2011年
目的 探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBX）对脂质代谢相关基因的影响及其在肝细胞脂肪变性发生中的作用。方法将质粒pIRES2-eGFP—HBX转染入HepG2细胞中，建立表达HBX的HepG2／HBx细胞模型；以转染空载体plRES2-eGFP（HepG2／pIRES2细胞）及未转染的HepG2细胞作为对照。转染后24、48、72h，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达；检测细胞内甘油三酯含量；RT—PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白I（SREBP-1）和肝x受体（LXR）αmRNA表达水平；WesternMot检测HBX，LXRa及脂肪酸合成酶（FAS）蛋白表达的变化。多组间比较采用成组设计的方差分析，多组间的两两比较采用q检验；各基因表达量之间的关系采用Pearson相关分析。结果在转染后24、48、72h，HepG2／HBx细胞和HepG2／DIRES2细胞中有GFP的表达并随时间延长而增多、增强，仅在HepG2／HBx细胞内有HBx表达，并且随时间的延长而逐渐增加，差异有统计学意义（F=32．21，P〈0．05），提示成功建立HepG2／HBx细胞模型；在转染后24、48、72h，HepG2／HBx细胞内LXRamRNA相对表达量分别为0．386±0．055、0．505±0．071、0．649±0．058，SREBP-1mRNA相对表达量分别为0．395±0．055、0．548±0．047、0．795±0．058；LXRG[蛋白的相对表达量分别为0．178±0．036、0．263±0．047、0．347±0．058，FAS蛋白相对表达量分别为0．436±0．055、0．608±0．053、0．827±0．046，各相同时间点均较对照组明显增加（P〈0．05或JD〈0．01），并均随时间的延长而逐渐增多（P〈0．05或P〈0．01），且与HBX表达量均呈正相关（rLXRa=0．994，rsREBP-1=0．984，r’LXRa=0．989，rFAS=0．991，P〈0．05）。HepG2／HBX细胞内TG含量与对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HBx-LXRa-SREBP-1／FAS通路可能参与了调节脂质代谢相关基因的转录和表达，可能是引起肝细胞脂肪变发生的重要分子机制之一�
陈娟沈薇程文会
关键词：肝炎病毒乙型脂代谢障碍HEPG2
乙型肝炎病毒X蛋白表达与肝细胞脂肪变性的关系及其机制被引量：6
2010年
目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis Bvirus X protein,HBx)在肝组织中的表达与慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)合并肝脂肪变性的关系及其可能的机制。方法对经病理证实的18例CHB及18例CHB合并肝脂肪变性的病例标本进行血脂、肝功能、血清病毒学及病理组织学指标分析,免疫组化法检测肝组织HBx、肝X受体(Liver X receptorα,LXRα)和脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)的表达。结果两组病例生化指标、HBV血清标志物及HBV-DNA载量、肝组织炎症活动度分级及纤维化程度分期的构成比差异均无统计学意义(P>0.05);HBx、LXRα和FAS表达的阳性率差异也无统计学意义(P>0.05);但CHB合并肝脂肪变性组HBx、LXRα和FAS的表达强度明显高于CHB组,且差异有统计学意义(P<0.05);在CHB合并肝脂肪变性组中,HBx与LXRα、LXRα与FAS及HBx与FAS的表达呈正相关。结论 HBx在CHB肝组织中广泛表达,在CHB合并肝脂肪变性组的表达明显增强,提示HBx可能通过诱导LXRα进而刺激FAS表达上调,参与CHB合并肝细胞脂肪变性的发生。
郑黎黎沈薇熊玲
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝细胞脂肪变性免疫组化
乙肝病毒X基因参与肝细胞脂肪变性的作用及机制的初步研究被引量：4
2011年
目的探讨沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法设立空白对照组(HepG2.2.15细胞)、阴性对照组(HepG2.2.15细胞转染阴性HK质粒)、shHBx转染组(HepG2.2.15细胞转染shHBx质粒)和HepG2组(HepG2细胞)。构建针对HBx基因的shHBx质粒,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染质粒24～96 h绿色荧光蛋白和HBx蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间,根据结果予油酸钠刺激细胞,甘油三酯(TG)检测细胞脂肪变程度,RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达,Western blot检测肝X受体α(liver x receptor alpha,LXRα)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果成功构建shHBx质粒并转染HepG2.2.15细胞;与空白对照组和阴性对照组比较,shHBx转染组HBx蛋白表达明显下降,于转染后48～72 h表达最低[(0.337±0.042)vs(0.577±0.032),(0.333±0.032)vs(0.654±0.049),P<0.01],差异有统计学意义;随着油酸钠处理时间延长,各组TG含量、SREBP-1c mRNA水平、LXRα和FAS蛋白表达均逐渐增加,与空白对照组和阴性对照组比较,同一时间点,shHBx转染组和HepG2组中表达较低[TG:(26.51±1.98)μg/mgvs(37.16±6.32)μg/mg;SREBP-1c:0.418±0.051 vs 0.516±0.037;LXRα:0.463±0.047 vs 0.630±0.026;FAS:0.463±0.047 vs 0.630±0.017,P<0.01],差异有统计学意义,而shHBx转染组与HepG2组相比水平近似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HBx在HepG2.2.15细胞脂变中具有重要作用,可能通过调节LXRα、FAS、SREBP-1c表达影响肝细胞脂代谢。
张琴彭俊沈薇
关键词：乙肝病毒X基因肝细胞脂肪变性质粒RNA干扰
碳水化合物反应元件结合蛋白对L02细胞糖脂代谢的影响
2011年
目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(Carbohydrate response element binding protein,ChREBP)在高糖诱导肝细胞脂变中的作用。方法分别以18和25 mmol/L葡萄糖培养L02细胞,以11 mmol/L葡萄糖培养L02细胞作为对照,甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色观察细胞脂变程度;免疫荧光观察细胞ChREBP的核转位情况;RT-PCR检测细胞肝型丙酮酸激酶(Liver pyruvate kinase,LPK)基因mRNA的表达水平,Western blot分析细胞脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,高糖可使L02细胞内甘油三酯和脂滴含量增加,刺激ChREBP核转位,上调LPK基因mRNA和FAS蛋白的表达水平。结论葡萄糖可能通过其代谢产物经ChREBP-LPK-FAS途径诱导肝细胞脂肪变性。
熊玲沈薇
关键词：肝细胞高糖肝细胞脂肪变性
与肝X受体相关的脂肪酸合酶转录调控区乙酰化组蛋白动态表达
2012年
目的利用肝X受体(liver X receptor,LXRs)激动剂T0901317,对脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)基因转录调控区的组蛋白乙酰化状态进行研究,探讨FAS基因转录表达中是否存在组蛋白乙酰化引起的染色质重塑事件。方法用实时荧光定量PCR方法测定FAS mRNA的转录表达时间谱。通过染色质免疫沉淀技术,结合实时荧光定量PCR测定脂肪酸合酶基因转录调控区4个位点上乙酰化组蛋白H3和乙酰化组蛋白H4的表达情况。结果①T0901317作用2 h开始FAS mRNA表达呈时间依赖性增高(1.09倍,P>0.05),16 h达到峰值(4.25倍,P<0.01),48 h时仍明显高于0 h的表达(2.59倍,P<0.01)。②T0901317作用30 min,组蛋白H3乙酰化水平显著高于0 h水平(P<0.05),1 h降至0 h水平以下(仅上游2 000 bp位点差异有统计学意义P<0.05),2 h又接近或高于0 h水平(仅LXRE位点增高有统计学意义P<0.05)。③T0901317作用30 min,组蛋白H4乙酰化水平均较0 h增高(P<0.05),而1 h和2 h,其水平均低于0 h(P<0.05)。结论在LXRs激动剂T0901317的作用下,FAS基因mRNA水平呈时间依赖性增高;而在FAS基因转录早期,FAS基因转录起始点上下游约2 500 bp位置范围均有组蛋白乙酰化引起的染色质重塑改变,但这种改变是随位置、时间和组蛋白的不同,呈动态变化的过程。
俞慧宏沈薇郭进军
关键词：肝X受体染色质重塑脂肪酸合酶
乙肝病毒X基因诱导肝细胞脂肪变性作用机制的研究被引量：1
2012年
目的探讨沉默肝X受体α(liver X receptorα,LXRα)基因对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法设立空白对照组(不转染任何质粒)、阴性对照组(转染阴性HK质粒)和shLXRα转染组(转染shLXRα质粒)。构建针对LXRα基因的shLXRα质粒并转染HepG2.2.15细胞,用荧光显微镜及蛋白质印迹法检测转染质粒24～96h绿色荧光蛋白和LXRα蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间,根据结果给予激动剂T0901317刺激细胞,用三酰甘油(TG)含量检测肝细胞脂肪变性程度,RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)蛋白及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果成功构建shLXRα质粒并转染HepG2.2.15细胞。与空白对照组和阴性对照组比较,shLXRα转染组LXRα蛋白表达下降,于转染后48～72h表达最低,差异有统计学意义(P<0.01);随着激动剂T0901317处理时间延长,各组HBx和FAS蛋白表达、TG含量、SREBP-1cmRNA水平均逐渐增加,同一时间点HBx蛋白在各组差异无统计学意义(P>0.05),而FAS蛋白、TG含量、SREBP-1cmRNA水平,在shLXRα转染组中的表达较空白对照组和阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HBx对脂代谢的调控可能部分通过LXRα/SREBP-1c/FAS途径实现。
张琴彭俊沈薇
关键词：肝X受体Α乙肝病毒X基因脂代谢障碍RNA干扰
乙型肝炎病毒HBx基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
2012年
目的构建乙型肝炎病毒HBx基因shRNA真核表达质粒,并筛选能有效抑制HBx表达的干扰序列。方法设计并构建针对HBx基因的3个siRNA表达质粒,经酶切和DNA测序鉴定,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜观察细胞转染效率,RT-PCR检测HepG2.2.15细胞中HBx基因mRNA的转录水平,Western blot检测HepG2.2.15细胞中HBx蛋白的表达水平。结果酶切和测序鉴定质粒构建正确,插入片段的碱基序列符合实验设计;质粒转染HepG2.2.15细胞后,HBx基因的转录水平、相对表达量及HBx蛋白的表达水平均明显降低(P均<0.01),3个重组质粒均能抑制HBx蛋白的表达,且质粒shRNA-HBx3抑制能力最强。结论已成功构建了靶向HBx基因的shRNA真核表达质粒,并筛选出具有高效沉默HBx基因的shRNA质粒,为进一步研究HBx感染合并肝细胞脂肪变性的发生发展奠定了基础。
张琴彭俊沈薇
关键词：X蛋白RNA干扰
低氧对L02细胞脂肪代谢的影响及其机制被引量：9
2012年
目的研究低氧对L02细胞脂质代谢的影响及其可能的机制。方法以正常人肝细胞株L02细胞为研究靶细胞，对照组和低氧处理组细胞分别在21％和1％氧浓度下培养。油红O染色、甘油三酯（TG）测定检测肝细胞脂肪变程度；RT-PCR法检测细胞内低氧诱导因子（HIF）2α、固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1c mRNA的表达情况；Western blot法检测HIF-2α亚基、脂肪分化相关蛋白（ADRP）、脂肪酸合成酶（FAS）蛋白的表达量。各组甘油三酯测定值行2×3的析因设计方差分析，两样本均数间比较采用t检验，其他多个样本均数的比较采用单因素方差分析与Newman-Keuls法检验。结果与对照组比较，低氧组L02细胞内出现脂质沉积，TG含量增多，且随低氧处理时间延长逐渐增多（F=115．04，P〈0．01）。低氧12、24、48h组SREBP—1c mRNA表达水平较对照组下调（0．236±0．043、0．287±0．044、0．342±0．049与0．503±0．037，F=28．37，P〈0．01），FAS蛋白表达水平较对照组下调（0．562±0．054、0．674±0．062、0．682±0．057与0．857±0．069，F=16．08，P〈0．01）。对照组未检测到HIF-20L表达，而低氧处理3h后HIF-2α蛋白表达逐渐增加，6h后达高峰，12、24h又逐渐降低，各时间点分别为0．609±0．031、0．973±0．067、0．792±0．056、0．437±0．038（，=85．30，P〈0．01）；低氧12、24、48h各组ADRP蛋白相对含量分别为0．319±0．043、0．732±0．056、0．873±0．066，均明显高于对照组0．211±0．019（P值均〈0．05），且随低氧时间延长，表达量逐渐增多（F=167．49，P〈0．01）。结论低氧通过HIF-2α-ADRP途径诱导肝细胞脂肪沉积。
程文会沈薇陈娟
关键词：细胞低氧脂肪分化相关蛋白
HBx与肝细胞脂肪变性关系及可能机制的细胞学研究被引量：6
2010年
从细胞水平探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)与肝细胞脂肪变性的关系,并探讨其可能分子机制。油红O染色及细胞内甘油三酯含量测定鉴定HepG2.2.15细胞和HepG2细胞的脂变程度;Western blotting检测HBx,肝X受体(liver X receptor alpha,LXRα)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果显示,C2.2.15组细胞脂变程度较CG2组细胞重。O2.2.15组细胞在24,48及72h的脂变程度及TG含量均较同一时间段的OG2组增加;Western blotting结果显示,HepG2.2.15细胞内有HBx蛋白表达,而HepG2细胞则无此蛋白表达;C2.2.15组细胞LXRα及FAS蛋白表达强度较CG2组细胞高。HBx蛋白与肝细胞脂肪变性存在密切的关系,其机制可能与HBx/LXRα/FAS信号通路有关。
郑黎黎沈薇
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白HBV肝细胞脂肪变性
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