国家自然科学基金(30871159)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：阮雄中陈压西赵蕾李青黄爱龙更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第二医院更多>>
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- 炎症对脂肪酸负荷的HepG2细胞FAT/CD36表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察炎症是否干扰脂肪酸负荷的人肝癌细胞系HepG2细胞脂肪酸转运蛋白/CD36(fatty acid transporter/CD36,FAT/CD36)的表达及脂质代谢。方法:分别给予不同浓度软脂酸(0.00、0.04、0.08、0.16、0.32 mmol/L)处理HepG2细胞24 h。采用Western blot和real-time PCR的方法检测HepG2细胞FAT/CD36的蛋白及mRNA的表达水平,再用油红O的方法观察细胞的脂质积聚情况。然后进一步选取0.04 mmol/L的软脂酸联合炎症因子[25 ng/ml的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)或20 ng/ml的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]处理HepG2细胞24 h后,观察细胞FAT/CD36的蛋白表达情况,再用油红O和酶法检测细胞内的甘油三酯(triglyceride,TG)水平,ELISA检测细胞内游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量。结果:软脂酸呈浓度依赖性上调HepG2细胞FAT/CD36的蛋白(r=0.873,P=0.000)和mRNA表达(r=0.884,P=0.000)及细胞内脂质积聚。炎症因子TNF-α和IL-6能明显刺激脂肪酸负荷的HepG2细胞FAT/CD36的蛋白表达进一步增加(P值分别为0.001和0.000)。油红O染色显示炎症因子TNF-α和IL-6能明显促进HepG2细胞的脂质积聚,胞内TG定量检测也显示炎症因子能促进HepG2细胞的脂质积聚,其中软脂酸联合TNF-α组与对照组及软脂酸组相比,P值分别为0.009和0.037,软脂酸联合IL-6组与对照组及软脂酸组相比,P值均为0.000。胞内FFA定量检测结果与油红O染色和TG检测结果一致,也显示炎症因子能促进HepG2细胞的脂质积聚,其中软脂酸联合TNF-α组与对照组及软脂酸组相比,P值分别为0.001和0.002,软脂酸联合IL-6组与对照组及软脂酸组相比,P值均为0.000。结论:炎症因子可以上调HepG2细胞FAT/CD36的表达并加重细胞内的脂质积聚。
- 殷鹭赵蕾李青黄爱龙陈压西阮雄中
- 关键词：炎症软脂酸CD36HEPG2细胞
- 炎症上调固醇调节元件结合蛋白1致C57BL/6J小鼠肝脏脂质积聚被引量：5
- 2013年
- 目的:研究炎症是否通过影响核转录因子固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory binding protein1,SREBP1)而致C57BL/6J小鼠肝脏脂质的异常聚集。方法:将8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6)组,2组均喂以高脂饮食,炎症组小鼠皮下注射酪蛋白建立慢性炎症模型,对照组注射相应量磷酸盐缓冲液,18周后处死,测定血清中炎症介质水平及肝脏中的脂质水平,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时定量PCR和Western blot检测肝脏肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein1,MCP1)及脂肪酸合成相关基因SREBP1、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase alpha,ACCα)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)的基因和蛋白水平。结果:与对照组相比,炎症组血清中的炎症因子细胞白介素-6(interleukin-6,IL-6)(t=3.866,P=0.003)和血清淀粉样蛋白A(serum amyloidA,SAA)(t=15.207,P=0.000)水平以及肝脏中炎症因子MCP1(t=2.56,P=0.028)和TNF-α(t=11.169,P=0.000)的mRNA水平均显著上升,Western blot结果亦显示炎症组小鼠肝脏中TNF-α和MCP1蛋白水平高于对照组。炎症状态下,肝脏甘油三酯(triglyc-eride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)含量显著高于对照组[(0.21±0.07)mg/mg vs.(0.40±0.14)mg/mg,t=2.98,P=0.014;(3.80±0.58)nmol/mg vs.(5.38±1.38)nmol/mg,t=2.596,P=0.027]。油红O结果显示,炎症使脂质积聚更显著。SREBP1(t=6.161,P=0.000)及其下游与FFA和TG合成相关的基因ACCα(t=14.937,P=0.000),FAS(t=6.976,P=0.000)的mRNA水平在炎症组均显著上升,Western blot结果亦显示炎症组小鼠肝脏中ACCα、FAS的蛋白水平高于对照组。结论:炎症可能通过上调SREBP1,加重脂质在肝脏的聚集。
- 柏灵灵赵蕾李青黄爱龙陈压西阮雄中
- 关键词：炎症肝脏脂质
- 炎症干扰胆固醇调节元件结合蛋白2致ApoE/SRA/CD36三基因敲除小鼠肝脏脂质的异常积聚被引量：1
- 2010年
- 目的 研究炎症是否通过干扰核转录因子胆固醇调节元件结合蛋白2（SREBP-2）而致ApoE/SRA/CD36三基因敲除小鼠肝脏胆固醇的异常积聚.方法 将8周龄ApoE/SRA/CD36三基因敲除雄性小鼠随机分为对照组（n=8）和炎症组（n=8）,2组均喂以西方饮食（Western diet）,炎症组小鼠皮下注射10%酪蛋白建立慢性炎症模型,对照组注射相应量磷酸盐缓冲液,14周后处死,测定血清中炎症介质和脂质的水平及肝组织中胆固醇含量,油红O、免疫组织化学染色后观察肝脂质沉积程度以及组织形态变化,实时定量PCR法检测肝脏SREBP裂解激活蛋白（SCAP）、SREBP-2及其下游基因低密度脂蛋白受体（LDLr）mRNA水平.对计量资料采用两样本均数比较的t检验进行统计学分析.结果 炎症状态下,血清中总胆固醇[（7.72±1.70）mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[（2.94±0.44）mmol/L]、高密度脂蛋白胆固醇[（2.24±0.63）mmol/L]水平均显著降低,与对照组[分别为（13.23±3.61）mmol/L、（9.28±3.66）mmol/L、（4.13±0.42）mmol/L]比较,t值分别为3.383、4.245、5.937,P值均＜0.05;肝组织中胆固醇含量显著增加;油红O染色表明,胆固醇在肝脏中的沉积异常增多（t=2.707,P＜0.05）;实时定量PCR和免疫组织化学检测结果表明胆固醇代谢相关基因SREBP2、LDLr和SCAP的mRNA和蛋白质表达水平显著增加. 结论炎症可以通过干扰SREBP-2导致低密度脂蛋白胆固醇摄取异常,造成肝脏脂质沉积增多和损害.
- 闫凤黄爱龙徐珍娥阮雄中陈压西
- 关键词：炎症肝脏
- 沉默胆固醇调节原件结合蛋白2基因对炎症因子所致HepG2细胞内胆固醇异常积聚的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨沉默胆固醇调节原件结合蛋白（SREBP）2对炎症因子所致HepG2细胞内脂质异常积聚的影响。方法通过脂质体转染SREBP2-shRNA质粒、G418抗性筛选HepG2细胞，建立沉默SREBP2的HepG2稳定细胞株（SREBP2 shRNA-HepG2）及阴性对照质粒HepG2稳定细胞株（NC shRNA—HepG2）。对两种细胞分别给予无血清培养处理（对照组）、炎症因子[肿瘤坏死因子（TNF）α 20ng／ml]、高脂[低密度脂蛋白（LDL）100μg／ml]和联合干预（20ng／ml TNFα＋100μg／ml LDL）处理。油红O染色及酶法检测细胞中脂质积聚情况，实时定量PCR和Western blot分别检测SREBP2及其下游靶基因低密度脂蛋白受体（LDLr）和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶的基因和蛋白表迭隋况。对数据用单因素方差分析及2×2×2析因设计方差分析比较。结果成功建立阴性对照稳定细胞株NC shRNA—HepG2及抑制SREBP2表达的稳定细胞株sREBP2 shRNA—HepG2。在NC shRNA—HepG2细胞中，TNFα处理使细胞内胆固醇积聚增加，并能上调SREBP2下游靶基因LDLr、HMGCoA还原酶基因和蛋白的表达，其mRNA相对表达量分别为1．68±0．03、1．31±0．05，F值分别为107．42，59．08，P值均〈0．01；其蛋白相对表达量分别为1．49±0．10、1．54±0．06，F值分别为46．24，247．10，P值均〈0．01。而在SREBP2 shRNA—HepG2细胞中，TNFα对胞内胆固醇沉积的作用可以被明显减弱，进一步基因和蛋白检测结果显示，炎症因子TNFα对LDLr、HMGCoA还原酶的上调作用亦被明显抑制。结论炎症因子通过促进SREBP2及其下游靶基因表达致HepG2细胞内胆固醇异常积聚，而通过RNA干扰抑制SREBP2的表达，可以明显减轻炎症因子所致的细胞内胆固醇的异常积聚。
- 廖梭蕾赵蕾陈曜李青陈昱杨阮雄中陈压西
- 关键词：脂肪肝胆固醇肿瘤坏死因子
