国家科技重大专项(2009ZX10004-104)
- 作品数：10 被引量：65H指数：5
- 相关作者：居丽雯程训佳周晓明王宏萍蒋露芳更多>>
- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院上海市公共卫生临床中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 4种呼吸道病毒悬液芯片检测方法的建立被引量：9
- 2013年
- 目的建立一种基于悬液芯片的呼吸道病毒多重检测方法,对4种呼吸道病毒或亚型进行快速检测和鉴定,包括人类偏肺病毒,呼吸道合胞病毒,流感病毒A和流感病毒B。方法依据NCBI公开数据库上各病毒的基因序列信息,设计并合成相关引物探针序列。抽提病毒RNA,经反转录后对目的序列进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于BioPlex 200检测荧光信号值。结果优化了多重PCR方法,hMPV、RSV与IfB的悬液芯片检测灵敏度约3DNA拷贝,IfA的悬液芯片检测灵敏度约30DNA拷贝。4种病毒或亚型同时检测的特异性高,省时,无交叉反应。17个经传统方法鉴定为呼吸道病毒的临床标本用悬液芯片检测16个阳性,检出率94.1%。标本经测序分析验证,结果与悬液芯片法一致。结论建立的同时检测4种呼吸道病毒或亚型的悬液芯片方法特异性高,为快速筛查和鉴定呼吸道病毒提供了新的手段。
- 陈沁裘敏燕付永锋徐锦居丽雯程训佳李瑶
- 关键词：呼吸道病毒多重PCR
- 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株被引量：1
- 2010年
- 目的 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株.方法 不重复收集2003年1-12月革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株292株,用酚-氯仿法抽提基因组DNA;首先以基因组DNA为模板,PCR扩增VEB基因;挑选阳性菌株34株再PCR扩增包含168位点的一段约110 bp的基因片段,高分辨率熔解曲线（high resolution melt,HRM）分析后测序验证.结果 VEB-3亚型与其他亚型基因通过HRM分析具有显著的差别;测序结果与HRM分型结果一致.结论 应用HRM技术可以准确快速筛选含VEB-3型基因菌株.
- 李刚魏取好倪瑛乔王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶
- 犬肾细胞系、人喉表皮癌细胞、非洲绿猴肾细胞混合培养检测常见呼吸道病毒和肠道病毒被引量：5
- 2011年
- 目的建立犬肾细胞系（MDCK）、人喉表皮癌细胞（Hep-2）、非洲绿猴肾细胞（Vero）混合培养以分离常见呼吸道病毒和肠道病毒，为临床检测主要呼吸道、肠道病毒提供新方法。方法采用MDCK、Hep-2和Vero制备混合瓶，接种甲型流行性感冒（流感）病毒、乙型流感病毒、腺病毒和肠道病毒71型流行株污染的咽拭子，观察细胞病变效应，以及采用单克隆荧光抗体、RT—PCR和PCR鉴定。结果对应不同病毒，敏感细胞系出现明显的细胞病变效应，荧光抗体检测可见特异的绿色荧光颗粒，PCR产物电泳结果可见不同的目的片段。结论混合细胞瓶一次可以分离培养多种常见呼吸道病毒和肠道病毒，通过后续的特异性检测手段即可检测，比直接检测标本抗原、核酸的检出率高。该方法有利于推动临床病毒性疾病的诊断。
- 高颖阳姜晨彦蒋露芳汪千力居丽雯
- 关键词：肠道病毒属细胞系
- 淋巴细胞趋化因子增强柯萨奇病毒DNA疫苗黏膜免疫及预防小鼠心肌炎的作用被引量：1
- 2010年
- 本研究在已建立的柯萨奇病毒B3型(CVB3)黏膜疫苗chitosan-pVP1基础上,引入C家族趋化因子,即淋巴细胞趋化因子(LTN),以期诱导更强的黏膜免疫应答,获得更有效的免疫保护作用。将pLTN与pVP1各50μg混合后,与chitosan形成共聚复合物,隔周滴鼻免疫小鼠,共4次;末次免疫后2周,检测血清IgG、粪便IgA及肠系膜淋巴结细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。同时,以3LD50/0.1mlCVB3腹腔感染小鼠,7d后检测血清肌酸激酶(CK)活性及心肌病理学改变。结果显示,与对照组相比,chi-(pVP1+pLTN)可显著提高CVB3特异性血清IgG水平、粪便IgA水平以及增强肠系膜淋巴结特异性CTL应答。病毒攻击后,chi-(pVP1+pLTN)组心肌炎发病率仅为16.7%,显著低于chi-(pVP1+pcDNA3.1)组的33.3%。心肌组织病理显示,chi-(pVP1+pLTN)组心外膜下仅有轻微炎症,而chi-(pVP1+pcDNA3.1)组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内尚有少量炎症浸润和坏死灶。结果提示,LTN与VP1质粒经chitosan共包装后进行滴鼻免疫,可增强CVB3特异性黏膜免疫应答,更有效地预防病毒性心肌炎的发生。
- 岳艳胡林昆徐薇熊思东
- 关键词：黏膜疫苗淋巴细胞趋化因子滴鼻免疫
- 上海地区2009年至2010年婴儿呼吸道感染病毒谱系的特征被引量：8
- 2011年
- 目的使用Seeplex RV15 ACE检测试剂盒检测上海地区婴儿呼吸道感染病毒的病原谱系。方法征集新华医院儿科呼吸道发热门诊O～1岁组患儿62例，以咽拭子对呼吸道分泌物采样，提取样本中病毒核酸，反转录合成cDNA，使用Seeplex RV15 ACE检测试剂盒扩增15种呼吸道病毒的目的基因，以琼脂糖凝胶电泳检测特异性产物条带，判定感染病毒。并以检出病毒与检出季节和临床特征进行比较。数据采用Fisher’s精确检验和卡方检验。结果62例呼吸道感染患儿从咽拭子中检出病毒阳性36例，占58．1％，其中呼吸道合胞病毒B型（RSV—B）、鼻病毒、腺病毒、肠道病毒（hEV）、冠状病毒229E—NL63、A型流感病毒、副流感病毒1型和3型、博卡病毒、偏肺病毒、B型流感病毒的检出率分别为12．9％、11．3％、11．3％、8．0％、6．5％、6．5％、4．8％、4．8％、1．6％、1．6％和1．6％。检出双重感染6例，三重感染1例，多重感染占阳性病例的19．4％（7／36）。冬季RSVB检出率，高于其他三季（Fisher’s精确检验，P=0．001），夏季检出hEV高于其他三季（Fisher’s精确检验，P=0．01）。结论RSVB、鼻病毒和腺病毒是上海地区婴儿呼吸道感染的前三位病毒病原体，多重病毒感染常见。
- 张国翠王宏萍胡芸文周晓明鲍依稀
- 关键词：呼吸道感染腺病毒科基因扩增
- 2008年与2009年全国及上海市甲乙类传染病发病的比较分析被引量：11
- 2011年
- 目的分析全国、上海市及上海市公共卫生临床中心2008年和2009年甲乙类传染病报告发病情况,为制定防病策略提供依据。方法对2008年和2009年全国、上海市及上海市公共卫生临床中心报告的甲乙类法定传染病发病情况进行统计分析。结果全国和上海市均以经血液传播疾病占首位,呼吸道传播疾病报告率有所上升,肠道传染病处于下降趋势。全国以肺结核和乙肝患者为主,分别占36.01%和32.31%,上海市则是以性病发病为主,占54.23%左右。结论传染病虽然得到了明显控制,但肺结核、艾滋病、梅毒和淋病的防治形势不容乐观,应针对相应疾病制定和完善传染病防制对策,加强防病工作基础建设。
- 张璐王宏萍周晓明
- 关键词：传染病疾病报告
- 高分辨率熔解曲线法检测临床常见KPC基因亚型被引量：3
- 2011年
- KPC是一种近年新出现的碳青霉烯酶,可以水解包括碳青霉烯类抗菌药物在内的所有β内酰胺类抗菌药物,且仅轻微或不被克拉维酸抑制,给临床治疗带来极大困难[1].目前已经公开报道的亚型有KPC-2至KPC-11,但临床中流行的主要是产KPC-2或KPC-3的肺炎克雷伯菌[2],
- 李刚赵燕魏取好王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：基因亚型熔解曲线法肺炎克雷伯菌抗菌药物碳青霉烯酶
- 佐剂LTN增强新型CVB3黏膜疫苗病毒性心肌炎保护效果的机制探讨被引量：1
- 2010年
- 目的 对黏膜佐剂淋巴细胞趋化因子（LTN）的机制进行初步探讨.方法 共凝聚法制备chitosan-pLTN和chitosan-pVP1复合物,混合后隔周滴鼻免疫小鼠,共4次,每次每种质粒50μg.末次免疫后2周以3LD50 CVB3腹腔感染小鼠诱导病毒性心肌炎,7 d后行心肌病理学观察.同时检测脾脏、肠系膜淋巴结（MLN）和颈部淋巴结（CLN）部位T细胞免疫应答、DC比例及CD86的表达.结果 LTN共免疫明显改善了CVB3性病毒性心肌炎炎症损伤;显著促进了脾脏、CLN和MLN部位特异性T细胞增殖和分泌IFN-γ的能力,显著上调了DC比例和DC表面共刺激分子CD86的表达.结论 黏膜佐剂LTN通过促进局部DC的招募和成熟来增强全身和黏膜部位特异性T细胞免疫应答,进而增强CVB3病毒性心肌炎黏膜基因疫苗的免疫保护效果.
- 岳艳徐薇熊思东
- 关键词：柯萨奇病毒黏膜佐剂淋巴细胞趋化因子
- MDCK、HEp-2、Vero细胞混合冻存适用于分离培养常见病毒研究被引量：4
- 2012年
- 目的建立犬肾细胞(MDCK)、人喉表皮癌细胞(HEp-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)3种细胞(MHV)混合细胞瓶冻存复苏方法,经冻存复苏的混合细胞用于分离常见呼吸道和肠道病毒,建立病毒性病原检测的方法学平台。方法对数生长期的MDCK、HEp-2和Vero细胞等量保存在含8%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DM-SO)冷冻保存液中,液氮经冻存4个月后复苏并进行细胞计数;在复苏后0 h、24 h和48 h倒置显微镜下观察细胞形态、细胞汇合;并用于分离培养常见呼吸道、肠道病毒,观察致细胞病变效应,采用直接与间接免疫荧光法鉴定。结果在液氮中保存4个月的MHV混合细胞,细胞复苏存活率超过99.20%,镜下细胞折光度好,细胞形态良好,均见到相应的致细胞病变效应和免疫荧光检测阳性结果。结论 MDCK、HEp-2和Vero细胞等量保存在含8%DM-SO冷冻保存液中液氮保存4个月复苏存活率高。混合细胞直接冻存复苏方法建立,为常见的病毒性病原分离培养提供了宽泛的合适细胞宿主,保证了病毒性传染病的快速诊断、实验室病毒性传染病监测的可操作性。
- 汪千力居丽雯蒋露芳蔡韵高颖阳姜庆五
- 关键词：上皮样细胞肠道病毒感染
- 浙江地区散发新型布尼亚病毒感染患者的临床特点及其基因序列被引量：25
- 2012年
- 目的分析发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）感染患者的临床特征、流行病学以及SFTSV基因序列。方法收集2011年5月至7月在温州医学院附属舟山医院感染性疾病科收治的5例重症发热伴血小板减少综合征（sFTS）患者，均经PCR检测SFTsV核酸确诊。采用流式细胞仪（FCM）检测CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋T淋巴细胞，分离的病毒株测序并与GenBank比对。结果SFTS患者典型临床表现为持续高热、全身肌肉酸痛、浅表淋巴结肿大、腹痛、腹泻，可伴消化道出血，在急性期WBC、PLT、CD3＋CD4＋T淋巴细胞呈进行性下降，最低分别为（0．97～2．00）×10^9／L，（12-42）×10^9／L和7．52％420．39％。2例患者血清中分离出病毒，其基因序列与GenBank中的SFTSV进行比对，依赖RNA的RNA聚合酶基因与BX-2010、L-WWG、LN3、JS4、SD4、HN6和AH12的同源性为96％，糖蛋白基因的同源性为94％，而N蛋白基因与JS4、SD4和LN4的同源性为95%；分离的2株病毒的上述三种基因序列的同源性为99％。结论SFTSV在浙江省有散发流行，以本土疫源性可能大，起病急，病情重，伴多脏器功能损害。
- 李世波薛川丁贤君刘瑞定薛宏怡仝振东柴能明王晔恺林志益程训佳
- 关键词：布尼亚病毒科感染血小板减少白细胞减少流行病学研究
