河南省自然科学基金(0611043000)
- 作品数：15 被引量：62H指数：4
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- 人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25～35)所致新生神经细胞损伤被引量：3
- 2010年
- 目的研究β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导新生大鼠神经细胞中蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡及人参皂苷Rb1对此作用的干预效应。方法从新生大鼠海马分离神经干细胞（NSCs）体外培养,诱导分化7 d后收获新生神经细胞,分3组：Aβ25~35组的培养基中加入20μmol/L Aβ25~35处理12 h;Rb1＋Aβ25~35组先在含10μmol/L Rb1的培养基中预处理24 h后,再用20μmol/L Aβ25~35处理12 h;对照组不加任何其他处理因素。RT-PCR和免疫细胞化学法检测各组新生神经元的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和磷酸化Tau蛋白的表达。结果Aβ25~35处理组与对照组相比,糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和细胞周期蛋白依赖性激酶5（CDK-5）的mRNA表达增加,蛋白磷酸酶2A（PP2A）的mRNA表达减少;荧光显微镜下,活化型GSK-3β（pY279,216）表达增加,PP2A表达降低;微管相关蛋白Tau（pS396）和Tau（pS262）的阳性细胞率明显增高。Rb1预处理可以显著降低Aβ25~35引起的上述蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和Tau改变。结论Aβ25~35诱导体外分化的新生大鼠神经细胞的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡和Tau蛋白过度磷酸化,人参皂苷Rb1可减轻Aβ25~35引起的上述作用。
- 段萍邢孟韬许燕韩雪飞李博赵庆霞鄢文海
- 关键词：新生神经元人参皂甙RB1淀粉样蛋白TAU
- 神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达
- 2011年
- 目的:检测神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达,探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSC)体外诱导分化为神经细胞的方法及人骨髓源性神经细胞的功能特征。方法:分离纯化hBMSC,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44、CD117在hBMSC上的表达;应用DMSO/BHA/FSK/BDNF联合诱导hBMSC向神经细胞分化;免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和多巴胺D2受体(DRD2)的表达;RT-PCR检测DRD2、γ-氨基丁酸A(GABAA)受体-α2亚基、5-羟色胺2(5-HT2)受体mRNA的表达。结果:流式细胞仪检测显示hBMSC的间充质干细胞相对特异性抗原CD44、CD117表达阳性,造血干细胞特异性抗原CD34、CD45表达阴性;hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导培养3d后,免疫细胞化学染色结果显示有NSE、DRD2阳性细胞;RT-PCR检测结果显示DRD2、GABAA受体-α2亚基、5-HT2受体的mRNA表达阳性。结论:hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导可分化为神经细胞,并表达DRD2等多种神经受体,有望成为应用细胞移植治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。
- 吴素霞柴立辉鄢文海邢莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化神经细胞神经受体
- CXCL12对大鼠海马培养细胞GABA和乙酰胆碱分泌的影响及其机制被引量：2
- 2011年
- 目的:观察CXCL12对体外培养的海马神经细胞神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和乙酰胆碱分泌的影响,并探讨其受体机制。方法:通过免疫荧光组织化学染色方法观察CXCL12和其受体CXCR4在细胞内的定位;ELISA方法分别检测海马神经细胞在体外培养过程中CXCL12的分泌变化、CXCL12对海马神经细胞神经递质分泌的影响、以及用CXCR4阻断剂(AMD3100)阻断CXCR4后神经递质释放的变化。结果:CXCL12主要分布在海马神经细胞的细胞浆内,细胞膜上也有表达,其受体CXCR4主要表达在海马神经细胞的细胞膜上;在海马神经细胞体外培养过程中,随时间延长(1、3、5、7、10 d),CXCL12的分泌逐渐减少;采用50 ng/ml的CXCL12作用于海马神经细胞后,随着培养时间的延长,GABA和乙酰胆碱的分泌出现不同的变化,其中乙酰胆碱的分泌逐渐增加,而GABA的分泌则呈现一过性下降又短暂轻微升高的趋势;通过AMD3100阻断其受体CXCR4,则乙酰胆碱分泌减少,但GABA的分泌增加。结论:CXCL12通过CXCR4受体引起乙酰胆碱分泌增加,GABA分泌减少。这些现象表明CXCL12可以作为一种重要的神经生长因子刺激GABA和乙酰胆碱的分泌。
- 刘素芳李长生王丽君韩雪飞严静郭美霞邢莹
- 关键词：海马CXCL12CXCR4
- 人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞转录GABA受体mRNA被引量：5
- 2008年
- 许燕段萍吴素霞韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：受体MRNA干细胞分化GABA神经元样氨基酸类神经递质
- 人参皂苷Rb1对Aβ_(25-35)诱导的大鼠神经细胞凋亡抑制作用观察被引量：8
- 2010年
- 目的观察人参皂苷Rb1对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的大鼠神经干细胞分化后神经细胞凋亡的抑制作用。方法分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,并诱导其分化。采用1、10、20、40μmol/L的Aβ25-35作用于分化后1周的神经细胞24 h,用MTT法检测算细胞存活率。另对分化后1周的神经细胞先加入5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1预处理24 h,再加入20μmol/L的Aβ25-35继续培养24 h,用MTT法检测算细胞存活率,用流式细胞术测算细胞周期和凋亡细胞率。结果 20μmol/L的Aβ25-35可使神经细胞存活率降至60.07%±2.75%,10μmol/L的人参皂苷Rb1可显著提高神经细胞存活率至85.75%±3.27%。不另加处理因素、继续培养48 h的分化后1周的神经细胞凋亡率为5.8%±1.4%,20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,神经细胞凋亡率增加,达51.2%±3.2%,加入10μmol/L的人参皂苷Rb1预处理后,20μmol/L Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡率下降至27.1%±1.5%(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1对由Aβ25-35引起的神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ25-35诱导的细胞凋亡有关。
- 赵庆霞许燕鄢文海韩雪飞邢莹
- 关键词：人参皂苷RB1神经干细胞神经细胞细胞凋亡
- 人参皂苷Rb1对内源性Aβ所致小鼠神经细胞Tau蛋白过磷酸化的干预作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨人参皂苷Rb1对神经干细胞的保护作用及机制。方法将人参皂苷Rb1作用于APP转基因鼠分化中的神经细胞,用免疫荧光化学和免疫蛋白印记法测定总Tau蛋白磷酸化水平及Tau蛋白在Ser-396、Ser-262位点磷酸化水平。结果与阳性对照组相比,人参皂苷Rb1处理组Tau蛋白的总磷酸化水平及在Ser-396和Ser-262位点磷酸化水平明显下降;而与阴性对照组相比,Tau蛋白总磷酸化水平及在Ser-396和Ser-262位点的磷酸化水平明显增高。结论人参皂苷Rb1具有一定神经保护作用;其机制可能为直接促进神经细胞活性或通过调节Tau蛋白上游作用因子的活性。
- 李国栋袁保梅鄢文海邢莹
- 关键词：APP转基因小鼠TAU蛋白过磷酸化人参皂苷RB1
- CXCL12通过PI3K/AKT信号通路对大鼠海马培养细胞乙酰胆碱分泌的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:观察CXCL12通过PI3K/AKT信号通路对体外培养的海马神经细胞乙酰胆碱合成和分泌的影响。方法:通过Western Blot方法观察CXCL12对培养的海马神经元PI3K/AKT信号通路和胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达量的影响;ELISA方法分别检测CXCL12对海马神经细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性和乙酰胆碱分泌的影响,以及PI3K/AKT阻断剂(LY2940002)阻断海马培养神经元PI3K/AKT信号通路后乙酰胆碱的分泌和AChE活性的变化。结果:在海马神经细胞体外培养过程中,采用50 ng/ml的CXCL12作用于海马神经细胞后,AKT磷酸化水平升高,ChAT蛋白表达增多,AChE活性减少。随着培养时间的延长(1,3,5,7 d),乙酰胆碱的分泌逐渐增加;通过LY2940002阻断PI3K/AKT信号通路,AKT磷酸化水平降低,ChAT蛋白表达减少,AChE活性增加,乙酰胆碱分泌减少。结论:CXCL12可能通过PI3K/AKT信号通路引起乙酰胆碱合成和分泌增加,表明CX-CL12可以作为一种重要的神经生长因子刺激乙酰胆碱的合成和分泌。
- 严静刘素芳郭美霞王晋韩雪飞邢莹
- 关键词：CXCL12乙酰胆碱胆碱乙酰转移酶乙酰胆碱酯酶
- 人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞表达单胺类受体mRNA被引量：1
- 2009年
- 目的检测体外人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)经DMSO/BHA联合诱导后所分化的神经元样细胞表达单胺类受体基因的状况,以探讨体外诱导hMSCs向神经元样细胞分化的条件和机制。方法采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化hMSCs,DMSO/BHA联合诱导分化,免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)的表达,RT-PCR检测5-HT2受体和多巴胺2受体(DRD2)mRNA。结果分离纯化的hMSCs加入诱导剂后,hMSCs形成多极神经元的形态;免疫组化结果显示NSE蛋白表达阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞表达5-HT2受体的mRNA,而不表达DRD2的mRNA。结论DMSO/BHA可诱导hMSCs表达5-HT受体基因,但不表达DRD2受体基因。
- 段萍许燕吴素霞韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：分化神经细胞5-HT受体
- SDF-1α对海马神经元突起延伸和增殖的影响(英文)被引量：2
- 2011年
- 目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变化;并采用阻断剂AMD3100阻断CXCR4受体,观察其对细胞的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光细胞化学方法显示SDF-1α和CXCR4主要表达在体外培养的海马神经元的胞膜和胞浆;不同浓度的SDF-1α改变了细胞的形态,促进了突起延伸;AMD3100则抑制了细胞突起增长;流式细胞仪检测显示SDF-1α减少了细胞凋亡。结论:SDF-1α可影响海马神经元突起延伸和凋亡效应,该机制可能与受体CXCR4有关。
- 刘素芳邢孟韬韩雪飞鄢文海景莹邢莹
- 关键词：形态学基质细胞衍生因子细胞凋亡
- 人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响
- 2012年
- 背景:前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。目的:观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组:①空白组:不加其他处理因素继续培养36h。②β-淀粉样蛋白组:培养24h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。③预处理组:先加入人参皂苷Rb1预处理24h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396]和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。
- 赵庆霞李冰华韩雪飞许燕吴国华
- 关键词：人参皂苷RB1Β-淀粉样蛋白25-35神经干细胞TAU蛋白磷酸化
