教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-10-0916)
- 作品数：10 被引量：50H指数：5
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- 同型半胱氨酸引起平滑肌细胞LDLR启动子区DNA甲基化改变的位点分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)引起平滑肌细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)启动子区DNA甲基化改变的特点及机制。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs)并鉴定,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy干预,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化改变,甲基敏感性限制性内切酶HpaII和BssHII分析LDLR DNA甲基接受能力。结果 50、100、200、500μmol·L-1Hcy组平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化(P<0.05),经限制性内切酶HpaII消化后,LDLR启动子区C↓CGG序列被酶切,经限制性内切酶BssHII消化后,LDLR启动子区GC↓GCGC序列被酶切,与对照组比较,DNA甲基接受能力下降,其中HpaII引起的效果更明显。结论 Hcy可使平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化的效应偏重于一般的CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小。
- 杨安宁王菊杨晓玲马长剑孙炜炜马胜超王磊徐华姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸低密度脂蛋白受体DNA甲基化平滑肌细胞
- HHcy对ApoE^(-/-)鼠动脉粥样硬化的影响及叶酸、VB_(12)的干预效应被引量：3
- 2011年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响及叶酸、维生素B1(2VB12)的干预效应。方法健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食。另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,随机平均分为高脂血症组、HHcy组、干预组。喂养14周后,取血测定血清Hcy及血脂水平,取主动脉进行石蜡包埋并切片,HE染色后检测主动脉斑块面积及内中膜厚度。结果 HHcy组血清同型半胱氨酸(Hcy)水平明显高于对照组与干预组(P<0.001),与对照组比较,其血脂LDL、TG、CHOL分别升高约2.2、7.6、7.2倍,HDL下降约63%(P<0.001)。HE染色可见三组ApoE-/-鼠均有AS斑块形成,HHcy组主动脉斑块面积6.21×105μm2明显大于高脂血症组3.99×105μm2与干预组4.41×105μm(2P<0.05)。AS斑块面积与其血清Hcy水平呈正相关(r=0.4898,P<0.001)。结论 HHcy导致ApoE-/-鼠AS病变形成,且病变程度依赖血清Hcy水平,叶酸和VB12的干预可有效缓解HHcy引起的血管损伤。
- 巩慧慧王菊孙炜炜马胜超马琳娜姜怡邓
- 关键词：叶酸维生素B12动脉粥样硬化
- 小鼠组织SAM和SAH在动脉粥样硬化评价中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl Homocysteine,SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-methionine,SAM)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)评价中的应用。方法采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测各组ApoE-/-小鼠(模型对照组、高蛋氨酸饮食组、叶酸和维生素B12治疗组)心脏、肝脏、肾脏组织中SAM和SAH含量的变化,并与正常对照组比较。HE染色光镜观察各组主动脉病理学改变。结果 HPLC实验数据表明,正常对照组、模型对照组、高蛋氨酸饮食组的小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量依次增加,治疗组小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量则有所降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,肾脏高蛋氨酸饮食组SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.05),治疗组肝脏、肾脏SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.01)。与高蛋氨酸饮食组比较,肝脏、肾脏治疗组SAM、SAH含量有明显差异(P<0.01)。同时,HE染色显示高蛋氨酸饮食组主动脉AS的病理改变明显。结论 SAM、SAH含量升高可能是高蛋氨酸饮食促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发生的重要机制之一。
- 梁宇廖国玲马琳娜曹成建姜怡邓
- 关键词：S-腺苷同型半胱氨酸S-腺苷甲硫氨酸APOE-/-小鼠
- 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响被引量：5
- 2013年
- 目的 :探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究。方法 :按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组(0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n=5)培养液孵育72 h后,采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变。结果 :同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 :LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用。
- 马胜超孙炜炜巩慧慧马长剑王菊田珏姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸甲基化人脐静脉内皮细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1
- 同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中ABCA1、ACAT1表达的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中三磷酸腺苷-结合转运子A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT1)表达的影响。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,并分别用50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12(Vit B12)干预72 h,并设对照组(不加入Hcy)。采用油红O染色检测泡沫细胞的形成。采用酶终点法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞CE流出的影响。采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ABCA1、ACAT1 mRNA表达;免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白表达。结果油红O染色显示Hcy加剧了泡沫细胞的形成,但不呈量效关系。实验组(加入50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+Vit B12)泡沫细胞阳性百分率均高于对照组(P<0.05、P<0.01),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。在Hcy的干预下,泡沫细胞胞内TC、FC、CE流出减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。100μmol/L Hcy+叶酸+VitB12组与100μmol/L Hcy组比较,前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多。RT-PCR结果显示ABCA1 mRNA表达下调,ACAT1 mRNA表达上调,均以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01);免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白的表达与其mRNA表达一致。结论 Hcy下调了ABCA1的表达,上调了ACAT1的表达,促使了泡沫细胞形成。
- 马琳娜梁宇于海娇徐支芳王艳华姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸
- 线粒体DNA氧化损伤在高同型半胱氨酸血症致载脂蛋白E-/-鼠心肌损伤中的作用
- 目的：探讨线粒体氧化损伤在高蛋氨酸饮食诱导载脂蛋白E-/-鼠心肌病变中的作用.方法：以12只健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食.另选5周龄雄性纯合子载脂蛋白-/-鼠(SPF级近交系C57B...
- 杨晓玲马长剑马胜超巩慧慧孙炜炜王菊姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症线粒体DNA心肌损伤
- 高同型半胱氨酸血症对ApoE^(―/―)鼠心肌酶谱的影响及与P53基因的相关性分析被引量：9
- 2013年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对载脂蛋白E基因敲除鼠(ApoE―/―鼠)心肌酶谱变化的影响及其与P53基因的相关性分析。方法分组:正常对照组(n=12)选择健康5周龄雄性C57BL/6J小鼠(SPF级),饲以正常饮食;另选用SPF级近交系C57BL/6J背景5周龄雄性ApoE―/―小鼠36只,随机分为3组,每组12只:ApoE―/―鼠对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、正常饮食加1.7%蛋氨酸、正常饮食加1.7%蛋氨酸加0.006%叶酸及0.000 4%维生素B12。喂养14周后,分离血清,用全自动生化分析仪检测血清中同型半胱氨酸和心肌酶谱含量,酶联免疫吸附法检测血清中氧化型低密度脂蛋白含量,实时定量PCR和免疫组织化学法检测心脏P53 mRNA和蛋白表达。结果 ApoE―/―对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸均升高,其中以高蛋氨酸组升高最显著(P<0.01);氧化型低密度脂蛋白含量亦平行升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。高蛋氨酸组血清乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶和肌酸激酶及肌酸激酶同工酶含量较正常对照组明显增高,在添加叶酸及维生素B12的干预组中血清肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和羟丁酸脱氢酶含量较高蛋氨酸组降低。实时定量PCR结果显示高蛋氨酸组P53 mRNA表达上调,免疫组织化学法检测P53蛋白的表达与其mRNA表达变化一致。P53表达与血清肌酸激酶含量呈正相关(r=0.7061,P<0.01)。结论 HHcy可引起ApoE―/―鼠心肌酶谱发生改变,其机制可能与同型半胱氨酸导致的氧化应激有关。这种改变与P53的表达呈正相关,P53亦可能参与其病理过程。补充叶酸及维生素B12对于食饵性HHcy具有良好的治疗效用。
- 姜怡邓杨安宁王菊巩慧慧马长剑杨晓玲李桂忠
- 关键词：高同型半胱氨酸血症心肌酶谱P53
- 内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的机制被引量：18
- 2013年
- 目的探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500μmol/L同型半胱氨酸和100μmol/L同型半胱氨酸+维生素B12+叶酸的培养液中孵育72 h。MTT法检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性;实时定量PCR测定内皮型一氧化氮合酶mRNA表达;化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶活性;硝酸还原酶法检测一氧化氮生成量。巢式降落式甲基化特异性PCR法检测内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化改变;同位素法检测DNA甲基化转移酶的活性。结果人脐静脉内皮细胞与不同浓度同型半胱氨酸孵育72 h后,人脐静脉内皮细胞的增殖活性降低,内皮型一氧化氮合酶mRNA表达、内皮型一氧化氮合酶活性和一氧化氮的含量明显下降。内皮型一氧化氮合酶基因启动子序列DNA甲基化程度随同型半胱氨酸浓度的升高而增加,且DNA甲基化转移酶活性升高,而叶酸和维生素B12有一定拮抗作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸可导致内皮型一氧化氮合酶基因启动子区序列高甲基化修饰,并出现相应的内皮型一氧化氮合酶基因表达下调,这可能是同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的重要机制之一。
- 姜怡邓孙炜炜马胜超王菊巩慧慧马长剑
- 关键词：同型半胱氨酸内皮型一氧化氮合酶DNA甲基化
- 细胞周期素A在同型半胱氨酸致血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）干扰细胞周期素A（cycfinA）表达进而扰乱细胞增殖周期之后对平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养，随机分为对照组、叶酸治疗组（Hcy100μ M＋叶酸30μM）、Hcy干预组（50、100、200、500μM）总计6组，分别以MTT检测VSMCs的增殖率．流式细胞仪测定细胞周期，荧光定量PCR测定CyclinA基因mRNA水平。结果MTT结果显示，不同浓度Hcy干预VSMCs72h后，Hcv对VSMCs细胞增殖的影响与剂量相关，随Hcy浓度增加细胞增殖显著，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测VSMCs周期分布结果显示，对照组细胞大多数处于G0／G1期，随着Hcy浓度的增加，VSMCs处于S期的细胞呈剂量依赖性增加，与对照组比较，差异有统计学意K（P〈001）。荧光定量PCR结果显示，不同浓度的Hcy干预VSMCs72h后，干预组与对照组相比CyclinA基因mRNA随Hcv浓度的增加而增加，叶酸治疗组与100μM Hcy组比较cyclinA mRNA表达降低（P〈0．05）。结论Hcy可通过调节CyclinA mRNA水平．影响细胞周期各时相分布途径，使得VSMCs的细胞周期调控紊乱，促进VSMCs的增殖，且叶酸可以拮抗Hcy引起的平滑肌细胞增殖的作用。
- 倪蓝马胜超王菊姜怡邓
- 关键词：动脉粥样硬化血管平滑肌细胞同型半胱氨酸细胞周期素A
- DNMT3B mRNA3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证
- 2014年
- 目的构建用于鉴定microRNA(miRNA)靶基因的报告基因系统并进行功能验证,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)3′非编码区序列,经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析DNMT3B与miRNA-125b的靶向关系,并用miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3B3′非编码区报告基因载体,经酶切和测序鉴定正确;共转染细胞24h后,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性,结果显示与空载体对照组相比,构建载体组荧光素酶活性下降了54.8%(P<0.01)。结论成功构建了DNMT3BmRNA 3′非编码区报告基因载体,且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。
- 曹成建杨晓玲王磊杨程蔡欣徐华王洁姜怡邓
- 关键词：DNA甲基转移酶3B微RNAS表遗传学
