浙江省自然科学基金(397510)
- 作品数：13 被引量：103H指数：6
- 相关作者：吕建新彭颖季敬璋金丽琴许艳芳更多>>
- 相关机构：温州医学院浙江省台州市中心医院温州市第三人民医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA被引量：2
- 2003年
- 目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术 ,对人单核细胞分泌的TNF -αmRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端带有氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,而且是“竖直”地包被在微孔内 ,另一个为检测探针 ,3’端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA ,RT -PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中 ,加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后加入亲和素 -辣根过氧化物酶 (avidin -HRP)显色系统催化底物显色 ,4 5 0nm波长下检测吸光度进行定量。结果 :该方法检测TNF -αmRNA的灵敏度 ,明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,而且具有良好的重复性 ,等量PCR产物作 10个复孔 ,吸光度的CV值为 7 2 % ,批间的CV值为 9 1%。在本实验中 ,我们首次尝试着用客观的数据来表示正常人中 1× 10 6个PBMCs中TNF -αmRNA的平均表达量 ,发现该表示方法直观明了 ,结果稳定 ,而且简便可行 ,不需要特殊的仪器及昂贵的试剂。结论 :本方法具有高灵敏度、高特异性、精确、简单易操作 ,结果数据化等优点 。
- 池永斌吕建新陆永绥
- 关键词：聚合酶链反应肿瘤坏死因子
- 牛膝多糖对老龄大鼠非特异性免疫功能的影响被引量：22
- 2007年
- 目的:探讨牛膝多糖(ABPS)对老龄大鼠非特异性免疫功能的影响。方法:牛膝多糖(ABPS)在老龄大鼠背部皮下注射21d,镜检计外周血白细胞数(WBC),HiCN法测定血红蛋白(Hb)含量,用全自动生化分析仪测定主要生化指标,用含10%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液贴壁培养肺泡巨噬细胞(AMΦ)和腹腔巨噬细胞(PMΦ)2h,并用全自动生化分析仪测定其乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性,摄取中性红试验检测巨噬细胞(MΦ)的吞噬功能,比色法检测脾脏、肝脏、大脑、肾脏和血清中的脂质过氧化物(LPO)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果:牛膝多糖(ABPS)试验组老龄大鼠AMΦ和PMΦ内ACP、LDH的活性均高于对照组(均P<0.01),AMΦ和PMΦ摄取中性红的能力也高于对照组(均P<0.01);且大脑、肝脏、脾脏中的LPO含量低于对照组(P<0.05,P<0.01),GSH含量高于对照组(P<0.05)。结论:牛膝多糖(ABPS)具有激活老龄大鼠AMΦ和PMΦ作用,能增强机体非特异性免疫功能。
- 金丽琴许艳芳金晶吕建新
- 关键词：巨噬细胞肺泡巨噬细胞腹腔
- TGF-β_1mRNA荧光实时定量PCR检测初筛方法的建立及初步运用
- 2006年
- 目的:建立荧光实时定量检测人转化生长因子异构体(TGF-β1)mRNA的方法。方法:抽取外周静脉血,予EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBRGreenⅠ,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA。结果:该法检测TGF-β1mRNA的灵敏度达105拷贝/ml,线性范围为105～1011拷贝/ml,Ct值的批内、批间变异系数分别为2.27%～2.56%和4.78%～5.22%。临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1mRNA的含量显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:FQ-RT-PCR应用于检测TGF-β1mRNA的初筛方法具有简便、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据。
- 胡璟谊李君季敬璋吕建新
- 关键词：逆转录-聚合酶链反应转化生长因子-Β1糖尿病
- ABPS诱导单核细胞HLA-DR表达(英文)被引量：7
- 2004年
- 目的 研究牛膝多糖 (ABPS)在体外激活单核细胞的效应。方法 采集健康成人抗凝血 ,用贴壁法分离单核细胞 ,调节细胞数接种到 2 4孔板。在 370 C ,5 %CO2 条件下 ,以同一时间不同ABPS浓度或同一ABPS浓度不同时间培养 ,用流式细胞术和电镜检测单核细胞的激活。结果 ABPS诱导单核细胞超微结构和HLA DR的改变。结论 ABPS上调HLA DR表达并能激活单核细胞。
- 王宇学彭颖吕建新金丽琴
- 关键词：牛膝多糖单核细胞HLA-DR
- 免疫磁珠及尼龙毛分离纯化T淋巴细胞的比较研究被引量：6
- 2005年
- 目的 :探讨免疫磁珠及尼龙毛分离纯化外周血T淋巴细胞的方法及其特点。方法 :用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,再分别以尼龙毛和免疫磁珠分离出T细胞 ,然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度、回收率 ,以台盼蓝检测细胞活力 ,MTT法检测细胞增殖性能。结果 :免疫磁珠方法分离后T细胞的纯度显著高于尼龙毛分离方法 (P <0 .0 5 ) ,而且回收率也大于尼龙毛分离方法 (P <0 .0 0 1 ) ,但二种方法分离的T细胞在细胞活力和增殖性能方面比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :在细胞生物学研究中 ,免疫磁珠分离法是有效分纯T细胞的较佳方法。
- 季敬璋吕建新
- 关键词：免疫磁珠T细胞
- 内皮细胞条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的实验研究
- 2005年
- 目的研究ECV-304条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的可能性。方法贴壁法分离培养外周血单核细胞并进行鉴定。用购买的ECV-304细胞株制备条件培养液和M-CSF诱导单核细胞分化,观察细胞形态变化,收集细胞,用免疫组化与异植物血凝素结合试验鉴定。结果获得的单核细胞具有CD14阳性细胞占84.3%;刺激一周后的单核细胞形态发生改变并且Ⅷ因子、异植物血凝素结合试验阳性。结论ECV-304条件培养液能诱导单核细胞分化为内皮细胞,提示内皮细胞来源的一条途径。
- 王宇学彭颖吕建新姚雅萱
- 关键词：条件培养液单核细胞内皮细胞分化
- 逆转录-聚合酶链反应酶联夹心杂交法半定量检测人白细胞介素-6 m RNA被引量：1
- 2003年
- 邹立林吕建新
- 关键词：半定量检测白细胞介素6MRNA
- 牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨被引量：30
- 2003年
- 目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。
- 季敬璋彭颖吕建新
- 关键词：牛膝多糖体外诱导T细胞IFN-Γ
- 核酸夹心杂交法半定量检测人IL-1α mRNA被引量：4
- 2003年
- 目的 建立一种半定量检测人外周血单个核细胞 (PBMC)表达IL 1αmRNA的方法。方法 确定RT PCR反应体系及扩增循环的各项参数 ,确定酶联夹心杂交反应所需的试剂、试剂的配制及杂交反应的温度、时间。选择最适数量的PBMC进行RT PCR并用核酸夹心杂交法检测扩增产物。结果 本方法检测IL 1αmRNA的灵敏度明显高于RT PCR琼脂糖凝胶电泳 ;无非特异性阳性信号出现 ,重复性良好 ,操作简便。结论 本方法是一种较好的定量检测IL 1αmRNA的方法 。
- 张黎明朱珊珊李素珍吕建新
- 关键词：IL-1ΑMRNA半定量检测
- 牛膝多糖抑制大肠埃希菌细胞粘附的实验研究被引量：28
- 2002年
- 目的 :研究牛膝多糖能否影响大肠埃希菌对细胞的粘附。方法 :使用 Hela细胞进行了粘附试验及粘附抑制试验。结果 :发现牛膝多糖浓度为 0 .8mg/ml时 ,对细菌的细胞粘附抑制最为明显 ,粘附率由(2 5 7.0± 5 .2 )个细菌 /细胞 降低到 (63 .6± 3 .6)个细菌 /细胞 。结论 :牛膝多糖对大肠埃希菌的细胞粘附具有抑制作用 。
- 彭颖吕建新
- 关键词：牛膝多糖大肠埃希菌细胞粘附
