教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-13-0747)
- 作品数：11 被引量：50H指数：6
- 相关作者：沈祥春徐旖旎陶玲张彦燕陈妍更多>>
- 相关机构：贵州医科大学贵阳医学院附属医院贵阳医学院更多>>
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- 氧化苦参碱通过调控MAPK信息通路改善醛固酮诱导的心肌细胞损伤被引量：6
- 2017年
- 目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的改善作用及其作用机制。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化新生大鼠心肌细胞进行培养,采用1×10^(-5)mol·L^(-1)ALD建立心肌细胞损伤模型。实验分为空白组,模型组(1×10^(-5)mol·L^(-1)ALD),ALD+OMT高浓度(3.78×10-4mol·L^(-1))组,ALD+OMT低浓度(1.89×10-4mol·L^(-1))组,ALD+JNK抑制剂(JNK I,5×10^(-6)mol·L^(-1))组,ALD+阿司匹林(Asp,1×10^(-5)mol·L^(-1))组,即OMT,JNK抑制剂和阿司匹林组先以相应药物预处理2 h后加入终浓度为1×10^(-5)mol·L^(-1)的ALD共同孵育24 h。二甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Giemsa染色观察心肌细胞形态学变化情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析OMT对ALD诱导JNK蛋白表达水平,JNK磷酸化(p-JNK)水平及mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,ALD可显著降低心肌细胞存活率(P<0.01)并改变细胞形态,OMT可显著改善醛固酮诱导的心肌细胞存活率降低(P<0.01)并使细胞恢复至正常形态;Western blot结果显示ALD可诱导JNK蛋白磷酸化水平升高(P<0.01),而OMT可显著抑制ALD诱导的p-JNK表达增加(P<0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,ALD可诱导JNK mRNA表达增加(P<0.01),使用OMT进行预保护后,各组基因表达均没有显著改变。结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抑制JNK蛋白磷酸化密切相关。
- 杨李强孙爱华徐旖旎张彦燕潘迪陈妍陶玲沈祥春
- 关键词：氧化苦参碱醛固酮心肌细胞损伤
- 环维黄杨星D对高交感活性诱导心肌细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨环维黄杨星D(CVB-D)对高交感活性诱导心肌细胞损伤的保护作用并进一步探讨该作用与氧化应激的相关性。方法:体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,去甲肾上腺素(Noradrenaline,NE)复制心肌细胞损伤模型,应用维生素E(VE)、CVB-D(10、50μmol/L)进行干预;通过心肌细胞形态变化、MTT法、LDH外漏率检测心肌细胞损伤情况;通过SOD活性、MDA含量分析氧化/抗氧化能力。结果:CVB-D低、高剂量组能显著升高损伤细胞存活率,降低LDH外漏率,CVB-D高剂量能显著升高损伤细胞SOD活性,并显著降低损伤细胞MDA含量。结论:CVB-D对NE诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用可能与改善氧化应激有关。
- 王羿徐旖旎江滟柏帅刘兴德沈祥春
- 关键词：心肌损伤环维黄杨星D
- 阿司匹林对醛固酮诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及机制被引量：1
- 2015年
- 目的探讨阿司匹林（aspirin,aspi）对醛固酮（ald）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CF）增殖的影响及可能机制。方法 0.08%胰酶消化1~3 d SD新生大鼠,差速贴壁法纯化SD新生大鼠原代CF。正式实验采用培养3~5代CF,分为4组,空白对照组：无小牛血清的高糖DMEM;醛固酮组（ald）：无小牛血清的高糖DMEM＋1×10-8mol/L ald;阿司匹林＋醛固酮组（aspi＋ald）：无小牛血清的高糖DMEM＋1×10-8mol/L ald＋1.11×10-6mol/L aspi;螺内酯＋醛固酮组（spiro＋ald）：无小牛血清的高糖DMEM＋1×10-8mol/L ald＋1×10-6mol/L spiro。HE染色法观察各组CF形态学变化;四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖;Western印迹分析TGF-β-Smad 2、3、4的蛋白表达。结果 HE染色结果显示,与对照组相比,ald可使细胞增生活跃,分裂相细胞显著增多（P〈0.01）;与ald相比,Aspi＋ald组及spiro＋ald组均可使细胞分裂显著减少（P〈0.01）。MTT法检测细胞增殖结果提示,与对照组相比,ald能够明显增加CF对MTT的代谢率,MTT值明显升高,与对照组相比差异显著（P〈0.01）;与ald组相比,aspi＋ald组、spiro＋ald组均可使CF对MTT代谢率减少,MTT值显著降低（P〈0.01）。Western印迹检测结果显示,以ald刺激CF后,TGF-β-Smad 2、Smad 3及Smad 4蛋白水平明显增高,以aspi及spiro干预后,CF中TGF-β-Smad 2、Smad 3及Smad 4蛋白水平表达较ald组明显降低,均有显著性差异（P〈0.05）。结论 aspir可抑制ald诱导的CF增殖,其作用机制可能与下调TGF-β-Smad 2、3、4的蛋白水平相关。
- 鲁玉明涂琳刘兴德沈祥春
- 关键词：阿司匹林醛固酮心肌成纤维细胞细胞增殖转化生长因子Β
- 氧化苦参碱抑制p38MAPK磷酸化改善醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖被引量：10
- 2015年
- 目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:采用胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD新生大鼠CFs做原代培养,建立ALD诱导CFs增殖模型。实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT高、低剂量组(3.78×10-4,7.57×10-4mol·L-1)。波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。采用噻唑蓝(MTT)法分析ALD对CFs增殖的量效与时效关系和OMT的抑制作用。实时荧光定量PCR分析p38MAPK mRNA的表达。Western blot分析p-p38MAPK,p38MAPK的蛋白表达。结果:MTT结果提示1×10-7mol·L-1ALD能够诱导CFs的增殖,且在24 h时增殖作用显著,7.57×10-4mol·L-1OMT可显著抑制CFs增殖。OMT对p38MAPK mRNA的水平无影响。OMT能够抑制p-p38MAPK蛋白的表达。结论:OMT可抑制ALD诱导CFs增殖的作用,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关。
- 付凌云黄海烽徐旖旎张彦燕罗红陶玲陈妍沈祥春
- 关键词：氧化苦参碱醛固酮心肌成纤维细胞丝裂素活化蛋白激酶
- 氧化苦参碱保护醛固酮诱导的心肌细胞损伤作用机制分析被引量：5
- 2015年
- 目的:研究氧化苦参碱(OMT)抑制细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的干预作用。方法:采用胰酶消化与差数贴壁分离纯化原代心肌细胞,免疫细胞化学分析心肌细胞纯度。实验分为空白组、模型组(1×10-5mol·L-1ALD)和OMT高(3.78×10-4mol·L-1),低剂量(1.89×10-4mol·L-1)组共4组。运用MTT法检测细胞存活率,LDH外漏法测定细胞膜损伤程度,蛋白免疫印迹法分析p-ERK1/2及ERK1/2蛋白表达,实时荧光定量PCR分析ERK mRNA表达。结果:OMT可抑制ALD诱导的细胞存活率降低和LDH外漏增加;与模型组比较,OMT预处理后p-ERK1/2蛋白表达明显下调。结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用与抑制ERK1/2蛋白磷酸化有关。
- 刘小红杨李强徐旖旎张彦燕潘迪张蓓陈妍陶玲沈祥春
- 关键词：氧化苦参碱心肌细胞细胞外信号调节激酶醛固酮磷酸化
- 环维黄杨星D对高交感活性诱导大鼠实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢的影响被引量：6
- 2014年
- 目的:研究环维黄杨星D对高交感活性诱导大鼠实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢障碍的改善作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、维生素E组及环维黄杨星D低、高剂量组,除正常对照组外其余各组均腹腔注射去甲肾上腺素(Noradrenaline,NE)复制实验性心肌损伤模型,同时灌胃给予相应药物,连续给药16d,期间检测各组动物体质量变化,16 d后进行心指数、羟脯氨酸含量、组织病理学检查、氧化/抗氧化指标(MDA、SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC)、能量代谢指标(Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase)的测定。结果:环维黄杨星D低、高剂量组均不同程度增加动物体质量,降低心指数及羟脯氨酸含量,改善氧化/抗氧化失衡,改善能量代谢障碍。结论:环维黄杨星D对高交感活性诱导的实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢障碍具有显著的保护作用。
- 徐旖旎王羿柏帅江滟刘兴德沈祥春
- 关键词：氧化应激能量代谢心肌损伤环维黄杨星D
- 丹酚酸B抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖与分化的作用被引量：11
- 2017年
- 目的:研究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与分化的影响,探讨Sal-B是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法:胰酶消化,差速贴壁分离纯化CFs,抗波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。建立AngⅡ诱导的CFs增殖分化模型。实验分为空白组(无血清DMEM),模型组(1×10^(-6)mol·L^(-1)AngⅡ),Sal-B低剂量组(2.5×10^(-5)mol·L^(-1)Sal-B+1×10^(-6)mol·L^(-1)AngⅡ)及Sal-B高剂量组(5×10^(-5)mol·L^(-1)Sal-B+1×10-6mol·L^(-1)AngⅡ)共4组。Sal-B预保护1 h,加入AngⅡ共同作用24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法分析Sal-B对AngⅡ诱导CFs增殖的细胞存活率,采用试剂盒(消化法)测定羟脯氨酸含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达情况。结果:MTT结果显示,与空白组比较,模型组AngⅡ显著诱导CFs异常增殖(P<0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量显著抑制AngⅡ诱导的CFs增殖(P<0.01);羟脯氨酸含量测定结果显示,与空白组比较,模型组羟脯氨酸含量显著升高(P<0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组含量均显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组α-SMA,ColⅠ蛋白表达显著上调(P<0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组α-SMA,ColⅠ蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:Sal-B可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,减少α-SMA,ColⅠ蛋白的表达,对AngⅡ体外诱导心肌纤维化进程具有抑制作用。
- 黄海烽王春花赵玲璐罗红徐旖旎陶玲张敏沈祥春
- 关键词：心肌纤维化心肌成纤维细胞丹酚酸B增殖分化
- 氧化苦参碱对醛固酮诱导心肌细胞损伤的保护作用被引量：7
- 2016年
- 目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的保护作用,并分析其对盐皮质激素受体(MR)转录和表达的影响。方法:采用胰酶消化差速贴壁法分离纯化新生Sprague-Dawley(SD)大鼠原代心肌细胞,采用肌钙蛋白和肌动蛋白免疫细胞化学法鉴定心肌细胞及其纯度,并建立ALD诱导的细胞损伤模型。采用噻唑蓝(MTT)法确定ALD导致心肌细胞损伤的最佳作用浓度与时间。实验分为空白组(无血清培养基),ALD组(最佳刺激浓度组),OMT高剂量(ALD+100 mg·L^(-1)OMT)组和OMT低剂量(ALD+50 mg·L^(-1)OMT)组。OMT预保护2 h,继续加入ALD共同作用36 h,并用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)外漏检测分析OMT对ALD诱导心肌细胞膜损伤的保护作用。逆转录-PCR(RT-PCR)分析MR mRNA水平。免疫印迹法(Western blot)检测MR和醛固酮合成酶(CYP11B2)的蛋白表达。结果:16 mg·L^(-1)ALD诱导心肌细胞36 h后能显著引起细胞损伤,OMT(50,100 mg·L^(-1))能够抑制ALD诱导的细胞活力下降及LDH外漏量升高。同时,OMT(50,100mg·L^(-1))能够抑制ALD诱导的MR mRNA水平和蛋白表达升高,上调CYP11B2蛋白表达。结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制ALD-MR系统激活有关。
- 陈妍温佳敏徐旖旎张彦燕罗红陶玲沈祥春
- 关键词：氧化苦参碱醛固酮盐皮质激素受体心肌细胞醛固酮合成酶
- 氧化苦参碱下调p38MAPK磷酸化及改善胶原沉积抑制TGF-β1诱导的CFBs增殖被引量：10
- 2015年
- 目的:研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的作用,并分析可能的作用机制。方法:试验分为空白对照组(无血清DMEM)、模型组(20μg·L-1TGF-β1)、OMT低剂量组(OMT-L组,1.89×10-4mol·L-1)、OMT中剂量组(OMT-M组,3.78×10-4mol·L-1)、OMT高剂量组(OMT-H组,7.56×10-4mol·L-1)和SB203580(p38MAPK阻断剂,1×10-5mol·L-1)。免疫细胞化学法鉴定CFBs中波形蛋白,测定TGF-β1诱导CFBs 24 h后α-SMA的表达情况;采用MTT法分析CFBs增殖的抑制作用;苦味酸天狼星红染色观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot分析p38MAPK,p-p38MAPK,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:MTT结果提示3.78×10-4,7.56×10-4mol·L-1的OMT对TGF-β1诱导的CFBs异常增殖具有抑制作用(P<0.01);α-SMA免疫细胞化学实验提示OMT能够抑制CFBs-my FBs转换;苦味酸天狼星红染色显示OMT能明显减少Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot表明OMT可以显著抑制TGF-β1诱导Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积及p38MAPK的磷酸化(P<0.01)。结论:OMT可抑制TGF-β1诱导CFBs增殖的作用并抑制相关胶原蛋白的表达,改善心肌纤维化,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关。
- 肖海徐旖旎罗红陈妍张彦燕陶玲江滟沈祥春
- 关键词：氧化苦参碱TGF-Β1心肌成纤维细胞P38MAPK
- 阿司匹林抑制醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的 研究阿司匹林对醛固酮诱导心肌成纤维细胞（CFs）增殖的抑制作用。方法 将培养3～5代SD新生大鼠的CFs分为空白组、模型组、阿司匹林组（1.11μmol·L-1）和阳性组（螺内酯1μmol·L-1）;用Giemsa染色法观察各组CFs的形态学变化,用ELISA法分别检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维,采用比色法分析上清液中羟脯氨酸的含量。结果 阿司匹林可有效抑制醛固酮诱导的CFs增殖;还可显著抑制醛固酮诱导的CFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分泌。结论 阿司匹林对CFs的增殖及胶原分泌有一定的抑制作用,具潜在的抗心肌纤维化作用。
- 鲁玉明涂琳刘兴德沈祥春
- 关键词：阿司匹林醛固酮螺内酯心肌成纤维细胞
