国家高技术研究发展计划(2002AA241341)
- 作品数：9 被引量：64H指数：6
- 相关作者：郭万柱徐志文朱玲王小玉陈陆更多>>
- 相关机构：四川农业大学河南农业大学中国农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建被引量：6
- 2009年
- 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到表达PCV2 ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒的候选疫苗毒株。
- 王印郭万柱王新徐志文朱玲王小玉
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因伪狂犬病毒重组病毒
- 伪狂犬病病毒3基因缺失株(SA215)的遗传稳定性研究被引量：9
- 2004年
- 测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次病毒的外源插入基因(LacZ)、缺失基因(TK、gE、gI)遗传变异情况。结果表明缺失株(SA215)毒价及对易感动物安全性未发生变化,外源插入基因得到稳定遗传,缺失基因未见回复突变,证明缺失株(SA215)具有良好遗传稳定性。
- 徐志文郭万柱朱玲唐善虎
- 关键词：代次伪狂犬病病毒毒价易感动物缺失基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫被引量：9
- 2006年
- 目的检测PRRSVGP5DNA重组质粒在猪体诱导的免疫反应以及细胞因子的佐剂效应。方法将表达PRRSVGP5的DNA重组质粒与表达3种细胞因子的重组质粒联合免疫SPF猪,经3次免疫后人工感染PRRSV,检测体液免疫、细胞免疫以及攻毒保护性反应。结果重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生中和抗体,效价达1:19.2,并可诱导机体产生较强的细胞免疫,攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降39%,表明表达PRRSVGP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力。pcDNA-IL-4与pCI-GP5共免可将中和抗体效价提高到1:35.5,且可增强细胞免疫反应,与对照组相比,病毒血症的出现频率减少17%,PRRSV阳性组织检出率下降64%;pcDNA-IL-2与pCI-GP5共免也可增强猪的细胞免疫,与对照组相比,病毒血症的出现频率下降50%,PRRSV阳性组织检出率减少59%;pcDNA-IFN-γ与pCI-GP5共免对病毒血症的出现及病毒在组织中的分布均没有抑制作用。结论动物试验结果表明IL-4及IL-2可作为PRRSVGP5DNA重组质粒的免疫佐剂。
- 任慧英郭鑫杨汉春王芳赵东升杜希珍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞因子免疫反应
- 猪繁殖与呼吸综合征DNA重组质粒对猪的免疫效应
- 2007年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)灭活疫苗、表达GP5蛋白的DNA重组质粒分别与表达IL-2和IL-4的重组质粒(pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4)联合免疫健康仔猪,经3次免疫后人工感染PRRSV HB-2株,检测仔猪体液免疫以及攻毒保护性反应。研究结果显示,重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生抗GP5抗体,最高ELISA抗体效价可达1∶285。攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降30.3%,与对照组相比,差异显著(P<0.05),表明表达PRRSV GP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力。pcDNA-IL-2与pCI-GP5联合免疫后,病毒血症的出现频率减少38.9%,PRRSV阳性组织检出率下降28.8%,与对照组差异显著(P<0.05);pcDNA-IL-4与pCI-GP5联合免疫后,最高ELISA抗体效价可达1∶320,病毒血症的出现频率下降38.9%,PRRSV阳性组织检出率减少34.8%,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。本研究表明,PRRS DNA重组质粒pCI-GP5对猪的免疫保护力是稳定的,真核表达的细胞因子pcDNA-IL-2与pcDNA-IL-4能够显著增强pCI-GP5的免疫保护力。
- 杜希珍郭鑫杨汉春霍彦坤陈艳红查振林
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗细胞因子免疫反应
- Construction and Vaccine Studies on a Pseudorabies Virus with Deletions in Glycoprotein I and Glycoprotein E Genes
- A pseudorabies virus(PRV) mutant with deletions in genes for glycoprotein I(gI) and glycoprotein E(gE) was con...
- Zhang Song-linJin Mei-linSong Yun-fengHu LiuXiao Ling-yunChen Huan-chun
- 关键词：VACCINE
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒基因缺失疫苗制苗用毒种特性研究被引量：12
- 2005年
- 本试验通过对PRV基因缺失株SA215(gE-/gI-/TK- )细胞培养特性、理化特性及形态发生过程进行研究,来确定gE、gI和TK 基因缺失对病毒特性的影响。结果表明,基因缺失对该毒株在培养细胞的吸附和穿入过程没有影响,但与亲本株相比,表现为生长掩蔽期延长,增殖速度减缓,但能达到相似的增殖滴度,并且基因缺失对病毒的理化特性影响很小。形态发生过程观察结果表明,PRV SA215 株在细胞培养上形态发生正常,能形成感染性病毒粒子,但在由核膜出芽和囊膜形成上受到一定程度的阻碍。本研究为疫苗研制和生产提供指导和依据。
- 陈陆郭万柱殷华平查光明
- 关键词：伪狂犬病病毒理化特性
- 伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gE^-/gI^-基因缺失疫苗的安全性和保护力研究被引量：17
- 2004年
- 对PrVEaTK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保护力进行了系统的研究。试验表明,该基因缺失疫苗105 0TCID50和106 0TCID50病毒剂量对妊娠母猪、新生仔猪和育肥猪均是安全的,并可保护妊娠母猪抵抗107 1TCID50强毒的攻击。新生仔猪免疫30d后,gE鉴别ELISA试验表明,PrVEaTK-/gE-/gI-免疫猪不产生针对gE的抗体。育肥猪在二次免疫后中和抗体水平显著升高。以105 0TCID50和106 0TCID50疫苗病毒接种家兔、猫和奶山羊等非靶动物,结果非靶动物未出现精神异常或死亡现象,说明该基因缺失疫苗具有极高的生物安全性。
- 刘正飞陈焕春吴斌何启盖秦永辉
- 关键词：伪狂犬病病毒鄂A株基因缺失安全性保护力
- 猪Ⅱ型圆环病毒-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建(初报)被引量：3
- 2006年
- 根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。
- 王印郭万柱王新徐志文朱玲王小玉
- 关键词：ORF2基因伪狂犬病毒重组病毒
- 伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：5
- 2007年
- 试验以pPGE DNA为模板,用1对分别含有EcoRⅠ和Bam HⅠ酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物,扩增出约1.7kb的含完整gE基因的DNA片段;目的片段经EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切后,插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE,并转化大肠杆菌DH5α;对温敏诱导表达所获产物进行SDS-PAGE、Western-Blot和琼脂双扩散检测。结果表明,gE糖蛋白得到了高效表达,表达产物约占总蛋白的17%。为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪,用表达纯化的gE蛋白为抗原,建立了GE-ELISA方法。选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6mg/L,血清最适稀释度为1∶40。测试结果:与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应,而与PRV标准阳性血清呈阳性反应。这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于猪伪狂犬病的临床诊断,尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别。
- 阳爱国郭万柱赵银丽徐志文王小玉
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因
- 伪狂犬病基因缺失疫苗SA215抗强毒潜伏感染能力被引量：6
- 2005年
- 通过建立能鉴别野毒和疫苗毒的多重PCR,确定试制的伪狂犬病基因缺失疫苗SA215对强毒潜伏感染的建立及随后被激活的影响。同时模拟了田间条件下对野毒潜伏感染猪接种的安全性和接种对已建立的潜伏感染的影响。结果表明,接种伪狂犬病基因缺失疫苗SA215在一定程度上能阻止强毒潜伏感染的建立和随后的激活。试制的疫苗对潜伏感染猪接种安全,对潜伏感染的消除有一定的作用,但不明显。
- 陈陆郭万柱徐志文宋振辉查光明王川庆
- 关键词：基因缺失疫苗伪狂犬病强毒田间条件野毒
