湖北省自然科学基金(2004ABA222)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对冠状动脉再狭窄的预防作用被引量：1
- 2007年
- 目的应用重组腺病毒载体介导的肝细胞生长因子(HGF)基因转染血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC),探讨HGF基因对其凋亡的诱导作用。方法以肝细胞中抽提的总RNA为模板,反转录cDNA,采用RT-PCR技术获得HGF基因,并引入酶切位点,转染大肠埃希菌,筛选阳性菌落,经酶切及测序证实后,转染腺病毒,制造病毒包涵体,经3轮扩増,制备高效表达HGF基因腺病毒载体(Ad-HGF)。以此感染VEC及VSMC,设为Ad-HGF组;再以人工合成HGF培养VEC及VSMC为阳性对照组(HGF组);以未感染Ad-HGF的细胞为阴性对照(对照组)。并采用流式细胞仪检测缺氧情况下各组细胞的凋亡率。结果VEC的Ad-HGF、HGF组细胞凋亡率均低于对照组,差异均有极显著性意义(均P<0.01),但VSMC的3组细胞凋亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结论腺病毒载体介导HGF基因感染VEC后能在缺氧情况下有效地阻止VEC发生凋亡,但不能有效抑制VSMC凋亡,提示对冠状动脉再狭窄有预防作用。
- 刘本德吴红军曾秋棠
- 关键词：血管内皮细胞血管平滑肌细胞缺氧冠状动脉再狭窄
- 人肝细胞生长因子基因重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:利用ADEASYTM系统,构建高效而又安全的肝细胞生长因子(HGF)基因腺病毒载体(AdHGF),以研究HGF基因在心脏内的表达。方法:从人胎肝中抽提总RNA,并以该肝细胞总RNA为模版,利用合成的1对引物,采用RTPCR技术获得HGF基因的cDNA,并引入酶切位点,先转入感受态质粒,再转化大肠杆菌进行扩增,筛选阳性菌落,经酶切及测序,证实目的HGF基因已经转入,再将该基因转入pUC18质粒,pUC18质粒与AdEASY质粒进行同源重组,用PacⅠ酶切成线性化DNA,利用脂质胺转染293细胞,经3轮扩増,制备高效表达并用绿色荧光标志AdHGF。并将该载体作实验组,与HGF组作比较,观察对VEC的抗凋亡作用。结果:在荧光显微镜发现293细胞发光率为100%,AdHGF的HGFcDNA经过测序鉴定与基因库序列一致。结论:AdHGF的成功构建,为冠心病转基因治疗的基础与临床研究奠定了基础。
- 王祥刘本德曾秋棠阮秋蓉
- 关键词：肝细胞生长因子腺病毒基因治疗
- 腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管平滑肌细胞的作用被引量：4
- 2006年
- 目的:研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子(HGF)基因感染血管平滑肌细胞后在缺氧和正常供氧时的细胞凋亡和迁移情况。方法:以肝细胞中抽提的总RNA为模板,反转录cDNA,采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)获得HGF基因,并引入酶切位点,转染大肠杆菌,筛选阳性菌落,经酶切及测序,转染腺病毒,经三轮扩増,制备高效表达HGF基因腺病毒载体(Ad-HGF),再感染人血管平滑肌细胞(VSMC)为观察组(Ad-HGF组);未感染为阴性对照组(DMEM组);以含人工合成HGF为阳性对照组(HGF组),分别在正常供氧和缺氧情况下观察细胞的凋亡和迁移情况。结果:与DMEM组及HGF组比较,Ad-HGF组在缺氧和正常供氧时VSMC的迁移率及凋亡细胞数差异均无显著性意义。结论:HGF基因感染VSMC后,在缺氧情况下并不促进VSMC的迁移,亦不抑制其凋亡。
- 王祥刘本德曾秋棠
- 关键词：血管平滑肌细胞凋亡迁移
- 腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管内皮细胞的作用被引量：4
- 2005年
- 目的:研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子(HGF)基因感染血管内皮细胞后在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧的情况下细胞的凋亡情况。方法:将分离、培养的内皮细胞分为3组,分别给予M199(对照组)、HGF(HGF组)和HGF基因腺病毒载体(Ad-HGF组),分别在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧3种情况下观察细胞的凋亡情况。结果:Ad-HGF组及HGF组细胞凋亡数均低于对照组(P<0.01),Ad-HGF组与HGF组细胞凋亡数差异无显著性意义。结论:腺病毒载体介导HGF基因感染内皮细胞后能在缺氧情况下有效地阻止细胞凋亡。
- 刘本德吴红军熊汝芳曾秋棠
- 关键词：血管内皮细胞凋亡缺氧
