国家自然科学基金(30270090)
- 作品数：13 被引量：119H指数：6
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- 相关机构：四川大学四川农业大学农业部沼气科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 番茄未成熟花粉离体成熟培养及花粉蛋白质检测的初步研究被引量：1
- 2007年
- 初步研究了番茄未成熟花粉离体成熟培养的可能性．从番茄花中分离出的双核早期花粉用＆液体培养基离体培养7～9d后，有1％的未成熟花粉培养成熟，并萌发出花粉管．同时，对不同时期花粉蛋白表达做了SDS-PAGE分析，结果：番茄花粉在单核期出现了分子量为21．2kD，26．0kD，33．4kD，69．1kD和97．1kD的5种特异蛋白，双核期出现了分子量为11．7kD，16．9kD，37．3kD，41．2kD和47．1kD的5种特异蛋白，萌发花粉管后出现了分子量为20．5kD，82．8kD和105．3kD的3种特异蛋白．随着花粉的发育，其蛋白质格局也在不断发生变化，单核期和双核期花粉中相对分子量小的蛋白质明显较多．
- 王克秀崔维科赵小光王胜华陈放
- 关键词：番茄花粉离体培养SDS-PAGE特异蛋白
- 一种广泛适用的RNA提取方法被引量：33
- 2008年
- 分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR实验表明,提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验.
- 淳俊郑彦峰王胜华陈放
- 关键词：硅藻土RNA提取小RNA乙二醇丁醚
- 水稻RSSG8基因启动子与GUS融合基因的构建及在烟草中的瞬间表达被引量：4
- 2004年
- 使用染色体步移(Genomewalking)法,从籼稻(Oryzasativasubsp indica)桂朝2号基因组中克隆到长度为471bp的水稻精细胞优势表达基因RSSG8的启动子片段R8PN,并进行了全序列测定和分析 该段序列中含有3个CAAT box,6个G box和多种植物顺式作用元件,但没有发现典型的TATA box,推测为一种特殊的启动子结构.为了鉴定RSSG8基因的基本启动子元件,将二条长度不同的5'端侧翼区缺失体(分别长471bp,260bp)定向插入载体pBI121中,取代原有的CaMV35S启动子,构了驱动报告基因GUS的植物表达载体pRGUS1,pRGUS2,通过农杆菌介导的瞬时表达法转化烟草叶片和花粉,快速鉴定启动子片段中起关键作用的区域.结果显示两个缺失片段都能启动GUS的表达,可以初步判定这两个片段具有启动子功能.
- 龚举成苟小平徐莺唐琳王乔王治涛陈放
- 关键词：启动子水稻GUS基因
- 麻疯树亚硝基谷胱甘肽还原酶(JcGSNOR)的克隆与功能分析被引量：1
- 2013年
- 本研究克隆出了麻疯树亚硝基谷胱甘肽还原酶(JcGSNOR)cDNA的全长序列,并分析了其在麻疯树各部位中的表达情况.结果表明,在所有参试的器官中,JcGSNOR基因皆有表达,其中在种子种表达量最大,其次为根茎,叶表达量最少.对新基因编码蛋白的理化性质进行分析后发现JcGSNOR的分子量约为40.256kDa,等电点约为6.74;同源性分析表明,JcGSNOR基因与其它植物GSNOR基因核甘酸序列相似度达到80%以上,说明JcGSNOR是GSNOR蛋白家族的一个新发现的成员.同时将JcGSNOR基因与pYES2表达载体相连接后,克隆进酿酒酵母,并经RT-PCR验证后证实得到JcGSNOR的转基因酵母.利用GSNO敏感性实验分析了JcGSNOR的酶学活性.并在GSNO处理条件下,检测了转基因酵母和野生型的生长曲线.结果表明,JcGSNOR对酵母的生长没有明显影响,但能明显提高酵母中GSNOR的活性.
- 马沅陈放
- 关键词：麻疯树基因克隆真核表达
- 水稻精细胞基因RSSG58的分子克隆和表达(英文)被引量：3
- 2003年
- 以水稻 (OryzasativaL .)精细胞与二细胞花粉的差减文库中得到的在精细胞中优势表达的克隆作为探针 ,筛选水稻精细胞cDNA文库 ,得到对应的两个全长cDNA克隆。序列分析表明两个全长cDNA阳性克隆长度分别为2 2 78bp和 2 4 37bp ,共同拥有一个由 5 79个氨基酸组成的开放读码框 ,分子量为 6 6 .7kD ,等电点为 4 .885。在Gen Bank中比较显示与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性 (46 % ) ,并具有肌球蛋白特色的结构域。资料显示肌球蛋白在高等植物生殖发育过程中起着重要作用。Southern杂交结果表明此基因在水稻基因组中以单拷贝形式存在。Northern杂交结果显示RSSG5 8基因在水稻精细胞中表达量很高 ,在其他组织和细胞中未检测到表达 ,同时还表明在精细胞中存在两类大小不同的转录本。用更为灵敏的RT_PCR方法进行检测分析表明此基因在叶、花粉母细胞期幼穗、单细胞花粉、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达 ,但在精细胞中表达量远远高于其他组织细胞 。
- 苗琛苟小平兰利琼鲍锦库徐莺王胜华陈放
- 关键词：分子克隆精细胞水稻
- 苦瓜(Momordica CharantiaL.)MADS-box基因BAG启动子的克隆分析及表达载体的构建被引量：7
- 2003年
- 作者提取苦瓜基因组总DNA,构建了DNA步移文库,并根据已克隆并公布的苦瓜MADS box基因BAG的基因序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出BAG基因起始密码子上游调控序列BAGP.对BAGP的鉴定和分析表明其具备大多数高等植物启动子的保守元件,预测它对BAG基因的表达具有一定的作用.为鉴定BAG基因的基本启动子元件,将基因5′侧翼序列做缺失片段分析,利用PCR方法从BAGP中得到3个大小不等两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段BAGP1,BAGP2和BAGP3,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体BAGPV1,BAGPV2和BAGPV3.
- 杨满业赵茂俊唐琳徐莺王胜华邢杰陈放
- 关键词：苦瓜启动子MADS-BOX基因PCR扩增
- 水稻愈伤组织分化与不同激素配比关系的研究被引量：17
- 2006年
- 由水稻中花11号成熟胚诱导而来的愈伤组织,通过三批不同激素不同配比的分化培养基培养,得到了最高为89.6%的出苗率.分化出苗率最高的培养基为MS+2.0mg/L ZT+0.02mg/L IAA+3%蔗糖+0.8%琼脂,细胞分裂素ZT和生长素IAA的比率为100∶1.
- 陈兴春牛蓓王克秀廖毅崔维科陈放
- 关键词：水稻愈伤组织激素分化
- RSSG58基因在水稻精细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- RSSG5 8是利用抑制差减杂交技术从水稻精细胞文库中筛选到的在精细胞中优势表达的基因 ,推测其编码的蛋白质与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性 (4 6 % ) ,并具有肌球蛋白特色的结构域。把RSSG5 8基因开放编码框连接到表达载体pQE30上 ,重组质粒在E .coliM15中表达出N端融合了 6×His的融合蛋白。SDS PAGE分析表明 ,表达产物的分子量约为 6 6kD ,其表达量占菌体总蛋白的 8.6 %。分离纯化融合蛋白来免疫家兔 ,制得了高效价、高特异性的多克隆抗体。Western杂交显示 ,在分离的精细胞内该基因编码的蛋白表达量很高 ,而成熟花粉和二细胞中只有微弱表达 ,单细胞花粉、花粉母细胞没有杂交信号 ,表明RSSG5 8基因在精细胞中优势表达。
- 苗琛兰利琼张小林鲍锦库曾宇杨满业白洁蔡应繁陈放
- 关键词：精细胞重组蛋白表达抗血清水稻
- 水稻精细胞优势表达基因RSSG58的启动子克隆和功能鉴定被引量：3
- 2005年
- 利用本实验室已经克隆的水稻精细胞优势表达基因RSSG58的cDNA序列与NCBI中的粳稻基因组文库进行比对、定位,结合生物信息学方法分析预测基因上游的启动子序列.在此基础上设计引物,以粳稻Oryzasativa(japonicacultivar-group)日本晴黄化苗总DNA为模板,采用DNA聚合酶链式反应(PCR)的方法扩增出基因上游1093bp和462bp两个不同长度的启动子缺失片段(分别命名为JP58B和JP58S),测序结果显示,其具有大多数高等植物启动子的保守元件.进一步构建启动子片段的植物表达载体pBI121-JP58B和pBI121-JP58S,瞬时表达结果显示,两个启动子片段对报告基因GUS均具有启动活性.
- 张小林王胜华唐琳徐莺贾勇炯陈放
- 关键词：水稻生物信息学
- 水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建被引量：8
- 2003年
- 根据公布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种"桂朝2号"黄化苗基因组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58.经对Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它对RSSG58基因在的特异表达方面具有一定的作用.为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得到3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58II和Pr58III,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPII和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化.其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础.
- 苗琛兰利琼鲍锦库唐琳徐莺王胜华陈放
- 关键词：精细胞启动子水稻绿色荧光蛋白
