国家自然科学基金(31172307)
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
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- 冷诱导RNA结合蛋白在应激状态下对细胞的保护作用机制被引量：5
- 2013年
- 冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein,CIRP)是目前哺乳动物中被广泛研究的冷应激蛋白之一。CIRP在脊椎动物间高度保守,在多种类型的细胞中均有表达,参与体内多种生物学过程。在应激条件下,CIRP从细胞核迁移到细胞质的应激颗粒中,通过与其特异靶基因结合,发挥一系列生物学效应,帮助细胞快速适应各种环境应激,尤其在温和低温、紫外线、缺氧等应激条件下,CIRP被诱导表达,通过与其特异靶基因结合、增加mRNA的稳定性、抗细胞凋亡等方式发挥细胞保护作用。文章重点对冷诱导RNA结合蛋白在应激状态下的细胞保护作用机制的研究进展进行综述。
- 唐佳佳汤承聂培婷岳华
- 关键词：抗应激细胞保护
- 冷诱导RNA结合蛋白参与小鼠H1N1甲型流感病毒感染的应答被引量：2
- 2016年
- 冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是哺乳动物间高度保守的多功能蛋白,但其在病毒感染中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨CIRP对甲型流感病毒感染的应答。用H1N1甲型流感病毒PR-8株滴鼻接种成年BALB/c小鼠,分别于感染后24、48、72、96、120h随机处死3只,用荧光定量RT-PCR和免疫组化法分别检测小鼠心、肝、脾和肺中CIRP基因和蛋白质的表达水平。基因定量检测结果显示,感染小鼠各被检器官中Cirp mRNA的转录量显著升高;免疫组化试验结果显示,CIRP在感染小鼠心肌细胞、肺泡上皮细胞、肺支气管上皮细胞和脾淋巴细胞的细胞质中表达量均有不同程度的升高。综上可见,CIRP参与机体对H1N1甲型流感病毒感染的应答,由于CIRP对炎性因子产生过程具有显著的调节作用,其在流感病毒感染过程中的作用值得深入研究。
- 聂培婷汤承岳华
- 关键词：甲型流感病毒荧光定量RT-PCR免疫组化
- H5N1禽流感病毒感染小鼠后内参基因的筛选被引量：4
- 2013年
- 本研究旨在评定H5N1禽流感病毒(H5N1 avian influenza virus,H5N1 AIV)感染小鼠后,脾脏组织中6个候选内参基因酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase 1,Hprt1)、琥珀酸脱氢酶A亚基(succinate dehydrogenase flavoprotein subunit,Sdha)、β-肌动蛋白(β-actin,Actb)、肽基脯氨酰异构酶A(peptidyl prolyl isomerase A,Ppia)和18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA,18S rRNA)的稳定性。通过H5N1 AIV强毒株A/DK/GD/378/08感染小鼠,采用Real-time PCR方法分别于12、24、48、72、96、120和144 h检测感染组与对照组中6个候选内参基因的表达水平,然后用Genorm软件对内参的稳定性进行评价。结果表明,正常小鼠脾脏组织中6个内参基因稳定度由高到低分别为Ywhaz/Hprt、Sdha、Actb、Ppia、18S rRNA;H5N1 AIV感染的小鼠脾脏组织中6个内参基因稳定度由高到低分别为Ppia/Sdha、18S rRNA、Hprt、Ywhaz、Actb;综合评价正常和H5N1 AIV感染后小鼠脾脏组织中6个内参基因的表达稳定度由高到低分别为Sdha/Hprt1、Ywhaz、Ppia、Actb、18S rRNA。因此,小鼠脾脏组织中Ppia和Sdha是研究H5N1 AIV在机体中复制时最理想的2个内参基因;Sdha和Hprt1则是在研究H5N1 AIV与机体相互作用时最理想的2个内参基因。
- 吴巧张斌汤承岳华
- 关键词：H5N1禽流感病毒小鼠内参基因REAL-TIME
- 冷诱导RNA结合蛋白参与小鼠对LPS的应答被引量：3
- 2014年
- 旨在研究冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是否参与机体对LPS的应答。将48只BALB/c小鼠随机分为4组,其中1~3组为LPS刺激组,分别按体重腹腔注射2.5、5、7.5 mg·kg^(-1)的LPS,第4组为健康对照组,腹腔注射等体积生理盐水。于注射后3、6、12、18 h每组随机挑选3只小鼠,无痛处死后采取各组小鼠的心、肝、脾和肾,用本研究建立的荧光定量RT-PCR检测各组织中Cirp mRNA的转录水平,用免疫组化法研究CIRP蛋白在各组织中的表达情况。荧光定量RT-PCR检测结果显示,LPS刺激后小鼠各被检器官中CirP mRNA的转录水平显著升高,而心中Cirp mRNA的转录水平则显著降低;免疫组化试验结果显示,LPS刺激后小鼠心、肝、脾和肾中;IRP的表达量均显著增加,且有显著的时效性。本研究证实CIRP参与小鼠对LPS的应答,为鉴定CIRP的新功能提供了证据。
- 周鸿淼汤承岳华唐佳佳
- 关键词：脂多糖荧光定量RT-PCR免疫组化
- 干涉鸡热休克蛋白70基因表达诱导鸡胚成纤维细胞凋亡被引量：1
- 2013年
- 为研究鸡热休克蛋白70(HSP70)与细胞凋亡的相关性及分子机制,通过构建表达靶向鸡hsp70的短发夹样结构小干扰RNA(shRNA)质粒载体,转染鸡胚成纤维细胞(CEF),干涉后18、24、28h用Annexin V-FITC方法检测干涉hsp70表达后细胞凋亡情况,同时用荧光定量RT-PCR测定凋亡相关基因Caspase3和Caspase8的表达水平。结果显示,与未干涉组相比,干涉组hsp70被分别敲低了75%、83%和96%,凋亡细胞数随着干涉时间的延长而增加,Caspase3表达水平升高,其表达量分别上调至250%、140%和110%,Caspase-8表达水平下降,其表达水平分别下降至76%、80%和34%。由此可见,鸡的hsp70可能主要通过线粒体途径保护CEF对抗凋亡。
- 杨帆汤承岳华
- 关键词：热休克蛋白70RNA干涉鸡胚成纤维细胞半胱氨酸蛋白酶
- 核不均一核糖核蛋白与病毒复制被引量：3
- 2015年
- 核不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类高度保守的RNA结合蛋白,广泛存在于动物的各种组织和细胞中,其主要生理功能是参与细胞中mRNA前体的剪接、mRNA的转运、mRNA的稳定性以及转录的调控。近年来的研究发现,hnRNPs可以通过与病毒核酸、病毒蛋白质结合,调控宿主细胞凋亡等机制影响病毒的复制过程。作者对hnRNPs与病毒复制关系的研究进展做一综述,以期为病毒与机体互作的研究提供参考。
- 冯晓辉汤承朱鑫岳华
- 关键词：病毒
- H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞后内参基因的筛选被引量：3
- 2014年
- 旨在评价H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞(PUVEC)后,肽基脯氨酰异构酶A(Ppia)、β-肌动蛋白(Actb)、核糖体蛋白L4(Rpl4)、酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Gapdh)等5个内参基因的稳定性.采用Real-time RT-PCR方法测定H1N1 SIV感染PUVEC后3、6、9、12、15、18、24和30h时5个内参基因mRNA的表达水平,未感染PUVEC为对照,采用2-△Ct值对内参基因进行相对定量,应用Genorm软件对其稳定性进行评价.结果表明,5个内参基因的稳定性由高到低分别为Ppia和Rpl4、Ywhaz、Actb、Gapdh,其中Ppia和Rp14稳定性相同.据此可知,Ppia和Rpl4在所选的5个内参基因中是研究H1N1 SIV与机体互作理想的2个内参基因.
- 朱鑫吴巧冯晓辉汤承岳华
- 关键词：内参基因
- 脂多糖染毒小鼠稳定内参基因的筛选被引量：1
- 2013年
- 本研究旨在筛选脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)染毒小鼠的理想内参基因。试验以健康小鼠肝脏和LPS染毒后3、6、12、18h的小鼠肝脏为研究对象,荧光定量RT-PCR评价YWHAZ、HPRT1、PPIA、ACTB和18SrRNA 5个内参基因的表达情况,并用geNorm软件分析其表达的稳定性。结果表明,除18SrRNA在LPS染毒时不能稳定表达外,其余4个内参基因在健康小鼠肝脏和LPS染毒小鼠肝脏中均能稳定表达,其中PPIA和YWHAZ的表达最稳定。本试验结果为荧光定量RT-PCR研究LPS与小鼠相互作用时mRNA表达水平提供了依据。
- 周鸿淼岳华汤承吴巧
- 关键词：内参基因荧光定量RT-PCR小鼠脂多糖
- 冷诱导RNA结合蛋白通过激活NF-κB信号通路影响H1N1甲型流感病毒的复制被引量：3
- 2016年
- 冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是NF-κB和ERK信号通路的上游调控因子,而这两条信号通路是甲型流感病毒复制和机体起始免疫所必需的,为探讨CIRP对H1N1甲型流感病毒复制的影响及可能的分子机制,构建了CIRP过表达BHK-21细胞系(Cirp+BHK-21),用Western blot检测NF-кB和ERK1/2的磷酸化水平,研究CIRP对NF-кB和ERK1/2的调节作用;用Real-time RT-PCR检测H1N1甲型流感病毒感染后Cirp+BHK-21和对照细胞中病毒拷贝数的动态变化,以及在特异性阻断剂PDTC阻断NF-кB通路的Cirp+BHK-21细胞中病毒拷贝数的动态变化。Western blot检测结果显示:过表达CIRP显著促进了BHK-21细胞中NF-κB的磷酸化水平(P<0.05),而对ERK1/2的磷酸化水平无显著影响;病毒定量检测结果显示:过表达CIRP能显著促进H1N1甲型流感病毒的增殖,感染后3、9、15、21h病毒在Cirp+BHK-21细胞中的拷贝数分别为对照组的111%、103%、167%和235%(P<0.05);阻断NF-κB信号通路后病毒的拷贝数显著下降,在感染后3、9、15、21h分别为未阻断组的98%、42%、19%(P<0.05)和7%(P<0.05)。从本研究结果可见,CIRP可通过活化NF-κB信号通路促进H1N1甲型流感病毒的复制。
- 聂培婷汤承岳华
- 关键词：病毒复制NF-ΚBBHK-21细胞
