重庆市卫生局医学科研项目(2010-2-079)
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 相关作者：马厚勋吴平李宝善王艳娇唐芸更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家自然科学基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Klotho基因与骨质疏松关系研究进展
- 2015年
- 骨质疏松症是随年龄增长出现的一种病理生理现象。目前，全世界约有2亿人患骨质疏松症。WHO定义骨质疏松是一种以骨量降低和骨微结构破坏为特征，导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的全身性骨病。遗传基因对骨代谢平衡调控方面起重要作用[1]，克老素（KL）是与寿命和各种衰老表型相关的基因，有研究表明在小鼠体内过表达可以抗衰老、延长寿命，而对KL鼠研究发现KL蛋白低表达加速皮肤、肌肉萎缩、动脉硬化、骨质疏松等衰老过程[2-3]。
- 邓小琴杨秋晨唐芸马厚勋
- 关键词：基因骨质疏松
- 老年大鼠组织中Klotho基因表达分布特征被引量：2
- 2012年
- 目的研究Klotho基因在大鼠组织中的表达及其分布。方法饲养SD大鼠分为对照组和老年组,每组6只。处死后取心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织,提取总RNA和总蛋白。应用RT-PCR和ELISA法检测Klotho mRNA及Klotho蛋白在各组织中的表达水平。结果两组大鼠心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织中均有Klotho基因表达,并且在肾脏、胰腺中高表达,脂肪中低表达。老年组Klotho mRNA、Klotho蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.001)。结论大鼠心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织中均有Klotho基因表达。老年大鼠组织中Klotho基因表达减少。
- 李宝善王艳娇马厚勋吴平
- 关键词：KLOTHOMRNA基因表达
- 体外转染Klotho基因对H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注的影响被引量：4
- 2012年
- 目的研究转染Klotho基因对H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注的影响。方法培养H9c2(2-1)大鼠心肌细胞,建立模拟缺血再灌注模型,Fermentas转染试剂介导小鼠Klotho基因转染H9c2(2-1)大鼠心肌细胞。实验分4组:对照组(Control组)、缺血再灌注组(I-R组)、转染Klotho基因组(Klotho组)、转染Fermentas转染试剂空载体组(Vehicle control组)。各组进行缺血再灌注后RT-PCR及免疫荧光法检测Klotho mRNA及Klotho蛋白表达,MTT法检测细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及Klotho含量。结果 Klotho组较I-R组和Vehicle control组Klotho mRNA、Klotho蛋白表达明显增加,LDH、MDA明显降低,细胞活性高(P<0.01)。结论 Fermentas转染试剂介导的Klotho基因转染H9c2(2-1)大鼠心肌细胞可保护H9c2(2-1)大鼠心肌细胞、减轻H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤。
- 李宝善马厚勋王艳娇吴平
- 关键词：KLOTHO心肌细胞缺血-再灌注
- 小鼠全长膜型Klotho蛋白cDNA表达体系的构建与应用被引量：2
- 2012年
- 目的克隆编码小鼠膜型Klotho(mKL)蛋白的cDNA片段,构建、包装Klotho重组腺相关病毒表达体系,并检测rAAV/mKL载体表达功能。方法选择RT-PCR扩增小鼠全长mKL蛋白的基因片段,将该片段亚克隆至腺相关病毒载体pAAV-IRES-hnGFP,采用酶切及DNA测序鉴定;利用AAV-293细胞包装rAAV/mKL,经转染7901细胞,检测其Klotho表达情况。结果本文成功克隆出序列信息和读码框完全正确的3 064 bp的小鼠Klotho基因片段,并构建pAAV/mKL克隆。在AAV-293细胞中包装出rAAV/mKL,病毒原液转染7901细胞后其Klotho mRNA表达上调,而细胞上清液Klotho蛋白也明显增加(P<0.01)。结论成功构建小鼠Klotho重组腺相关病毒载体(pAAV/mKL),获得了rAAV/mKL,并经转染7901细胞验证其基因表达功能正常,这就为进一步研究Klotho基因治疗衰老相关性疾病提供了技术基础。
- 李宝善王艳娇马厚勋吴平
- 关键词：KLOTHO腺相关病毒
- 腺相关病毒介导的klotho基因表达对去势大鼠骨Runx2及MMP-13表达的影响被引量：13
- 2012年
- 目的探讨腺相关病毒介导的klotho(KL)基因表达对去势骨质疏松大鼠的调控作用。方法 SD雌性大鼠随机分为假手术组(S组)和手术组,外科去势术后12周再随机分为模型组(O组)、17β-雌二醇组(E组)、KL基因组(KO组)和空质粒组(GO组),实验12周后处死。取股骨、胫骨测骨密度;冰冻切片及免疫组化法观察肾KL荧光及KL蛋白表达;RT-PCR和免疫组化法检测骨Runx2、MMP-13 mRNA及蛋白表达;HE染色观察骨组织形态学变化。结果 KO组和E组骨密度高于O组和GO组(P<0.05);KO组大鼠肾有小鼠KL基因特异性表达;与O组相比,KO组Runx2 mRNA表达明显上调,MMP-13 mRNA表达显著下调(P<0.05);免疫组化分析KO组Runx2吸光度值为411±96,显著高于O组的353±50(P<0.05);KO组MMP-13吸光度值为397±84,显著低于O组的656±89(P<0.05)。KO组、E组和S组大鼠骨小梁排列紧密,连接成网,形态结构较完整,明显优于O组和GO组。结论 KL基因表达上调可减缓去势大鼠骨质疏松症的发展及骨组织微结构的破坏,提示KL基因可能在骨质疏松症的发展中扮演重要角色。
- 王艳娇马厚勋李宝善吴平
- 关键词：KLOTHORUNX2MMP-13骨代谢
