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噬菌体展示技术筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白分子受体被引量：1: 2011年; 目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预测等生物信息学分析,获得5个与血吸虫抱雌沟蛋白有相互作用的蛋白或多肽。结论采用筛选噬菌体展示文库的方法成功获得抱雌沟蛋白相互作用分子。; 何金桃石艳丽刘萍萍刘金明石耀军林矫矫金亚美; 关键词：日本血吸虫

日本血吸虫幼虫巨大致死基因片段的克隆、表达及免疫效果分析: 2011年; 为研究日本血吸虫(Schistosoma japonnicum)幼虫巨大致死基因(Lethal giant larvae)的生物学功能,本研究应用荧光定量RT-PCR分析SjLgL基因在S.japonnicum不同发育阶段的表达情况,构建重组表达质粒pET-SjLgL进行诱导表达,对重组蛋白进行western blot鉴定;重组蛋白刺激免疫动物进行免疫保护试验,检测IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ的变化。结果表明,SjLgL基因在S.japonnicum不同发育时期均有表达,成虫期略高于童虫,雄虫高于雌虫。Western blot鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原性。免疫保护试验结果表明,免疫小鼠分别获得了22.34%的减虫率和55.49%的肝脏减卵率。血清学检测结果显示重组蛋白免疫小鼠后产生了特异性IgG抗体。细胞因子检测结果表明,重组蛋白刺激免疫动物主要诱发产生Th1型的免疫应答。本实验结果表明该重组蛋白在小鼠体内可诱导产生部分免疫保护效果。; 石艳丽刘萍萍杨云霞刘金明林矫矫宋铭忻金亚美; 关键词：日本血吸虫荧光实时定量PCR 免疫保护效果

RNAi silencing of calcium-regulated heat-stable protein of 24 kDa in Schistosomajaponicum affects parasite growth: ＜正＞The calcium-regulated heat-stable protein of 24 kDa（CRHSP-24） is a major calcineurin phosphoprotein that fu...; Zou Xiang~2 Jin Yamei~(1*) Lin Jiaojiao~1 (1,Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences; 文献传递

酵母双杂交诱饵蛋白日本血吸虫抱雌沟蛋白重组质粒的构建及鉴定被引量：3: 2010年; 为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein ofSchistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒。根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒。随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况。结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长。可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质。; 吴启进金亚美李勉刘金明王小波石火英林矫矫; 关键词：酵母双杂交技术自激活

日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示抗原对小鼠血吸虫病免疫效果观察被引量：3: 2009年; 在前期研究中我们利用日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库,共获得10种阳性噬菌体克隆。本研究选择其中5种噬菌体克隆单独或联合免疫小鼠,观察其对血吸虫成虫合抱的影响以及对血吸虫病的免疫预防效果。结果显示,19号克隆单独免疫和6号、18号混合免疫在预防实验中分别取得了40.53%和31.14%的减虫率及35.31%,44.65%的肝脏减卵率。研究结果提示,19号、6号和18号噬菌体展示的EST序列编码基因具有一定的抗血吸虫生殖免疫效果,在血吸虫疫苗研究方面具有重要价值。; 何金桃金亚美刘金明吴启进宋震宇石耀军岳城; 关键词：日本血吸虫小鼠免疫

日本血吸虫重组抗原rSjGALE对小鼠的免疫保护效果分析: 2013年; 前期研究结果表明日本血吸虫(Schistosoma japonnicum)UDP-葡萄糖表异构酶(GALE),在抗血吸虫病方面有一定的免疫保护效果,尤其是对雌虫产卵有较大影响。为制定更适宜的免疫保护方案,本研究选用206佐剂与rSjGALE重组蛋白联合免疫动物,结果表明,该蛋白与206佐剂联用有一定的免疫保护作用,免疫后小鼠产生了特异性抗体,且在减虫、减卵、减孵化等方面均有一定作用。; 曹宇凡乔洪宾刘萍萍杨云霞石耀军李浩刘金明林矫矫金亚美; 关键词：日本血吸虫免疫保护

日本血吸虫卵壳蛋白前体基因Sj423的克隆表达及分析: 2009年; 据日本血吸虫菲律宾株编码卵壳前体蛋白的一段230bp的序列设计PCR引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出日本血吸虫中国大陆株相应的基因片段、然后根据测序结果设计一系列引物,用5’RACE和3’RACE法扩增出该基因cDNA的5’和3’端,再根据测序结果设计全长引物,用RT-PCR方法扩增出大小为423bp的片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株卵壳前体蛋白基因的完整阅读框,对相应基因组区段测序证实该基因没有内含子(GenBank登录号:AF519182)。将其克隆到表达载体pET28c(+)中,在大肠杆菌中获得表达,融合表达产物分子量约为20.9 kD。Real-ti me PCR结果显示该蛋白在尾蚴感染宿主后第23d即卵壳形成时高表达。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性。; 金亚美程国锋刘金明傅志强石耀军林矫矫蔡幼民; 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达

利用RNAi和表达谱芯片分析日本血吸虫Sj34.9基因的功能被引量：2: 2012年; 目的分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能,为进一步研究该基因提供依据。方法采用RNA干扰(RNAi)技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰,利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9基因RNAi组与对照组相比,显著差异表达的基因共378个,其中上调基因202个,下调基因176个;通路分析显示,表达差异基因主要与信号转导、信号分子间相互作用及各类物质代谢有关;基因本体论分类结果显示,多数基因与分子间结合、膜构成、细胞过程和机体生长发育及代谢相关。结论 Sj34.9基因可能对日本血吸虫的形成、生长、发育、调节、代谢等具有重要作用。; 刘萍萍石艳丽杨云霞刘金明林矫矫金亚美; 关键词：日本血吸虫 RNA干扰(RNAI)表达谱芯片

18日龄日本血吸虫酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：1: 2009年; 为揭示血吸虫生长发育机理，深入研究血吸虫与宿主、血吸虫雌雄虫之间蛋白质的相互关系，本研究选取血吸虫进入终末宿主体内18天时的虫体（发育成熟初期），采用Clontech Matchmaker技术成功构建日本血吸虫的酵母双杂交cDNA文库。该文库具有基因多样性和足够大的库容量，库容量为2．5×10^6pfu／mL，插入的双链cDNA片段的长度在0．25～2．0kb之间，文库重组比率为97．9％，具有良好的代表性。该文库的构建为筛选相互作用蛋白并进一步阐明其生理意义提供了基础。; 李勉金亚美刘金明程国锋石耀军张龙现蔡幼民林矫矫; 关键词：日本血吸虫酵母双杂交 CDNA文库雌虫雄虫

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国家自然科学基金(30800819)

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