目的:探讨微小RNA-19b(microRNA-19b,miR-19b)在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法:应用qRT-PCR方法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3)中miR-19b的表达情况。将miR-19b抑制剂或阴性对照寡核苷酸转染到OVCAR-3细胞中,Transwell实验检测miR-19b的表达对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹分析(Western blot)技术检测miR-19b对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的表达及对PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。双报告基因实验用于检测miR-19b与PTEN的3'-UTR区之间的相互作用。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织及卵巢癌细胞系SKOV-3和OVCAR-3中miR-19b高表达,其相对表达水平分别为3.56±0.68、3.01±0.02、3.78±0.04(P均<0.05)。Transwell实验表明,抑制miR-19b的表达可降低OVCAR-3细胞的侵袭和迁移能力。上调miR-19b的表达可抑制OVCAR-3细胞中PTEN蛋白的表达水平,并使磷酸化的AKT蛋白的表达水平显著升高。双报告基因检测结果显示,与对照组相比,miR-19b可与PTEN的3'-UTR区结合使其重组载体的荧光素酶活性下降。结论:miR-19b在卵巢癌细胞中存在异常高表达,可促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,有望作为卵巢癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。
目的:探讨二甲双胍是否能够逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,以及其可能的作用机制。方法:CCK-8法检测二甲双胍作用后卵巢癌细胞顺铂耐药株C13K和CP70细胞对顺铂的耐药性变化,以及转染针对切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complemention 1,ERCC1)的特异性小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)后C13K和CP70细胞耐药性的变化。实时荧光定量PCR法检测不同浓度二甲双胍作用后,C13K和CP70细胞中ERCC1基因表达的变化。蛋白质印迹法检测二甲双胍作用后C13K和CP70细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路的激活和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的抑制情况,以及联合或不联合AMPK信号通路阻断剂Compound C作用后ERCC1蛋白的表达情况。同时,蛋白质印迹法检测p38MAPK信号通路抑制剂SB203580作用后耐药细胞中ERCC1蛋白表达的变化,以及二甲双胍作用联合p38MAPK si RNA转染前后耐药细胞中ERCC1蛋白的表达变化。结果:二甲双胍能够逆转C13K和CP70细胞对顺铂的耐药性(P<0.05)。二甲双胍作用能够降低C13K和CP70细胞中ERCC1 m RNA和蛋白的表达水平(P<0.05),并激活AMPK信号通路(P<0.05);而联合应用AMPK信号通路阻断剂Compound C可以阻断二甲双胍的这种作用(即ERCC1蛋白表达水平升高)(P<0.01)。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580作用后,C13K和CP70细胞中ERCC1蛋白表达水平降低(P<0.05);而二甲双胍作用可降低p38MAPK的磷酸化水平(P<0.01),抑制p38MAPK信号通路。二甲双胍作用转染了p38MAPK si RNA的C13K和CP70细胞后,ERCC1蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:二甲双胍可能逆转卵巢癌顺铂耐药株对顺铂的耐药性,并且这一作用可能是通过抑制p38MAPK信号通路和降低细胞中ERCC1的表达而实现的。
