国际科技合作与交流专项项目(2012DFB33450)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 相关作者：尹丹丹江山张雪梅代洁姚静更多>>
- 相关机构：成都生物制品研究所有限责任公司成都生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨被引量：3
- 2013年
- 目的:制备5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素衍化物的结合物,探讨结合过程中多糖分子大小、多糖蛋白投入比、反应时间等因素对结合终产物的影响。方法:应用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸酯(CDAP)活化剪切后的5型肺炎球菌荚膜多糖,在缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作用下与连接了二酰乙二腈(ADH)的破伤风类毒素(TT)进行偶联反应,经分子筛层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素的结合物,并检测其生化指标,免疫原性等。结果:剪切后的多糖免疫原性良好,其与TT的结合物在分子筛上可以很好分离;描述了多糖活化时CDAP的投入量,蛋白与多糖投入比,反应时间等对结合效率、结合物分子量、游离糖含量和结合物的多糖蛋白比影响。合成的结合物在免疫小鼠后,多糖特异性IgG抗体几何平均滴度(GMT)较多糖显著提高,显示免疫增强效应。结论:CDAP方法可以应用于PN5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备。
- 尹丹丹周觉非刘威邹莎莎杨溢尧马诚崔长法江山张雪梅葛永红
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗破伤风类毒素
- 1型肺炎球菌多糖竞争ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 目的:建立竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),测定1型肺炎球菌多糖浓度。方法:以1型肺炎球菌多糖为包被抗原,待测多糖为竞争抗原,与优化的抗1型肺炎球菌多糖抗体反应,建立标准曲线,并验证该方法的特异性、准确性和精密度。结果:优化后的1型肺炎球菌多糖包被浓度为1 500 ng.mL-1,抗多糖血清稀释度为1∶100K。检测线性范围23～1 500 ng.mL-1,最低检测限为12 ng.mL-1,回归方程为B/B0=-0.31 lg[PS1]+1.30,线性相关系数为R2=0.99。批内和批间精密度分别为6.5%和8.8%,测定培养基中标准1型多糖的回收率为98.2%。结论:本研究建立的竞争ELISA方法,特异性、准确型和精密性均较好,可以特异性地检测1型肺炎球菌多糖浓度。
- 刘威廖红梅姚静江山崔长法
- 19F型肺炎球菌荚膜多糖与载体蛋白P64K结合物的制备及免疫原性被引量：4
- 2012年
- 目的:采用改良胺化还原法,重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白(rP64K)作为载体蛋白,制备19F型肺炎球菌荚膜多糖(PN19F)结合物。方法:在胺化还原法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下衍化rP64K,蛋白衍化后再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合。采用HPLC、电泳、免疫印迹等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平。结果:电泳和免疫印迹证明了结合物制备成功。动物免疫产生了高滴度的抗PN19F的抗体,并有免疫记忆发生。结论:新的结合方法和新的载体蛋白能有效提高结合效率,以本工艺制备PN19F蛋白结合疫苗是可行的。
- 周觉非姚静尹丹丹陈思杨溢尧代洁张珂饶海林李春阳江山张雪梅
- 关键词：结合疫苗免疫原性
