国家自然科学基金(40876102)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：广东海洋大学广东省教育厅广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
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- 南极衣藻谷胱甘肽-S-转移酶基因的表达及其对大肠杆菌低温耐受性的增强作用
- 2013年
- 谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物体内一种重要的抗氧化酶,为阐明GST在南极衣藻(Chlamydomonas sp.ICE-L)中的具体地位,采用实时荧光定量PCR对不同温度下南极衣藻的GST基因的表达进行了分析;并构建了原核表达载体pET28a(+)-GST,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过平板培养法探讨了重组菌E.coli BL21(pET28a(+)-GST)对低温胁迫的耐受性。结果显示,GST在0℃时表达量最高,最高可达对照组的两倍多;pET28a(+)-GST重组表达载体在E.coli BL21中实现了高效表达,且主要以包涵体形式存在,经HisTrap HP柱分离纯化获得高纯度的GST融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot分析得以验证;对低温胁迫实验发现南极衣藻GST蛋白的表达可以提高重组菌E.coli BL21对低温的耐受性,说明GST基因对南极衣藻适应南极低温环境具有重要作用。
- 彭跃跃丁燏王金慧简纪常鲁义善刘莹
- 关键词：谷胱甘肽-S-转移酶
- 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析被引量：2
- 2011年
- S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,SAHH)是一种细胞内广泛存在的酶,在调节生物体转甲基化反应中占据重要地位。本研究通过RT-PCR及RACE-PCR技术克隆了南极冰藻(Chlamydomonas sp.ICE-L)S-腺苷同型半胱氨酸水解酶全序列,命名为ICE-LSAHH。ICE-LSAHH全长1 844 bp,包括5′非编码区36 bp,3′非编码区344 bp,含有一个较长的poly(A)尾。开放阅读框1 461 bp,编码487个氨基酸。根据推导的氨基酸序列预测其分子量为53.0 kD,理论等电点为5.16。SignalP 3.0、TMHMM Server v.2.0、NetNGlyc 1.0和NetPhos 2.0预测结果显示,ICE-LSAHH蛋白不存在信号肽与跨膜区,含有1个N-糖基化位点及23个磷酸化位点。利用ClastalX 2.0及MEGA 5.0软件,以邻位相连法对南极冰藻及其他物种SAHH构建系统进化树,结果显示,ICE-LSAHH与杜氏盐藻(Dunaliella salina)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、小球藻(Chlorella variabilis)等有较近亲缘关系。利用SWISS-MODEL程序和PyMOL Viewer软件成功模拟了ICE-LSAHH蛋白亚基的三维结构,该结构包括20个α-螺旋和12个β-折叠,且存在3个结构域:N端底物结合域、NAD结合域和C端域。可见,SAHH基因存在于南极冰藻并进行了有效的表达,该蛋白定位于细胞质,进一步证实SAHH是一个进化上比较保守的蛋白。
- 王金慧丁燏简纪常吴灶和
- 关键词：CHLAMYDOMONAS生物信息学
