黑龙江省科技攻关计划(GA09B301-2)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
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- 相关机构：黑龙江八一农垦大学黑龙江省兽医科学研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位
- 多杀性巴氏杆菌是动物机体上呼吸道和眼部黏膜的常在菌群,当机体受到应激或其他呼吸性病原体感染时,常发生内源性感染。牛巴氏杆菌病多发于运输应激的牛群或者犊牛群中。现有的牛出败灭活疫苗免疫原是荚膜血清型B型的多杀性巴氏杆菌,然...
- 何泊宁
- 关键词：抗原表位
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌isdB基因克隆、表达及其抗原性鉴定被引量：1
- 2011年
- 为了构建含牛源金黄色葡萄球菌isdB基因的原核表达载体,并确定其在大肠杆菌表达系统中的表达效果,应用PCR方法扩增出isdB基因片段与原核表达载体pQE-30,构建了重组原核表达载体pQE-30-isdB,将该重组载体转化至E.coliXL1-Blue中诱导表达蛋白。经SDS-PAGE和Western blot鉴定,PCR扩增出约1 938 bp的基因片段,测序结果与GenBank上发表的MW2株核苷酸和氨基酸序列的一致性均为98.6%;成功表达出约72 ku的蛋白,与IsdB蛋白的相对分子质量大小一致;Western blot分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。本次试验成功构建了IsdB蛋白的原核表达系统。
- 崔莉朱战波朱洪伟崔玉东朴范泽
- 关键词：金黄色葡萄球菌ISDB原核表达
- 牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：10
- 2019年
- 为确定黑龙江省2个规模化奶牛场犊牛急性呼吸道感染的病因,笔者进行了病原的分离纯化,细菌16S rDNA基因和多杀性巴氏杆菌特异性基因OmpH鉴定、生化试验、药敏试验、半数致死量试验、荚膜血清型分型及22种毒力因子的检测,以确定主要病原的种类、型别及生物学特性。结果表明,从死亡牛肺和患病牛鼻拭子分离的2株病原菌均为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,分别被命名为WC16551和LY01,序列分析结果表明,其与牛源多杀性巴氏杆菌同源性达到99%以上。药敏试验显示2株菌均对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。半数致死量结果表明,LY01菌株的毒力明显强于WC16551菌株,2株分离菌均携带19种毒力因子,未检出hgbB、toxA和nanB三种基因。上述研究结果表明,导致2个牛场发病的主要病原菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。
- 何泊宁周金玲赫鸣睿刘增禄刘增禄王丽吴陈华黄雯静刘宇岳山刘宇
- 关键词：毒力因子
- 抗金黄色葡萄球菌卵黄抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：2
- 2011年
- 本试验通过矩阵法对最佳包被抗原量及其他ELISA条件进行优化,建立一种检测抗金黄色葡萄球菌卵黄抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于免疫后卵黄抗体水平的监测。并将该方法与试管凝集法进行敏感性比较。结果表明,本ELISA法抗原最佳包被量为105个/孔,抗体最佳使用稀释倍数为1:100,酶标兔抗鸡二抗工作浓度为1:2000。通过本试验建立的ELISA方法检测卵黄抗体的水平,发现卵黄抗体在三免后第20天左右达到高峰,阳性水平至少持续到初免后的120d。
- 李丹史同瑞王岩刘宇吴博王爽朱战波
- 关键词：乳房炎金黄色葡萄球菌间接ELISA抗体水平
- 牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的表达与纯化被引量：4
- 2013年
- 试验对多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因进行克隆、鉴定,并在原核系统中表达。以多杀性巴氏杆菌(CVCC448)强毒株基因组为模板,扩增OmpH基因,连接T载体,经测序鉴定正确后与表达载体pET-28a连接构建重组表达质粒OmpH-pET28a,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21菌株内,抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导,表达产物通过镍离子亲和层析纯化,之后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,OmpH基因的编码区为978bp,编码326个氨基酸残基,融合蛋白分子质量约为37ku。Western blotting检测结果显示,表达的重组蛋白OmpH可与鼠抗多杀性巴氏杆菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。多杀性巴氏杆菌OmpH基因的成功表达,为进一步研究其免疫作用奠定了基础。
- 胡旭梁宏儒姜东君赵达高佳滨陈为宏尹辉乔波朱战波
- 关键词：多杀性巴氏杆菌克隆
