国家杰出青年科学基金(30700350)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- PKH26荧光标记大鼠内皮祖细胞在慢性损伤肝内迁移示踪
- 2009年
- 背景:课题组早期研究发现门静脉回输内皮祖细胞可以改善肝纤维化,但是将其应用于临床尚有很多问题需要解决,如回输路径、细胞的分布情况等。目的:探讨PKH26荧光标记的大鼠内皮祖细胞在慢性肝损伤肝内迁移过程中的示踪。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2008-08/2009-02在北京大学人民医院肝病研究所完成。材料:SPF级健康成年SD大鼠100只,由解放军军事医学科学院动物中心提供。红色荧光染料PKH26为SIGMA公司产品。方法:取16只大鼠,贴壁法分离培养内皮祖细胞,并行PKH26体外标记。实验设立3组:正常对照组4只大鼠,不进行任何干预;二甲基亚硝胺组40只大鼠,通过腹腔注射二甲基亚硝胺10mg/kg建立肝纤维化模型;四氯化碳组40只大鼠,通过四氯化碳/橄榄油灌胃建立肝纤维化模型。造模后,二甲基亚硝胺组、四氯化碳组大鼠经尾静脉注入1mLPKH26标记的内皮祖细胞悬液(1×106个细胞)。主要观察指标:PKH26标记率和细胞存活率,通过荧光共聚焦显微镜观察大鼠损伤肝内内皮祖细胞的迁移及CD31的表达。结果:流式细胞仪检测结果显示PKH26标记的内皮祖细胞阳性率为99%,荧光显微观察发现锥虫蓝染色后PKH26标记细胞存活率均>90%。输注1d后,两种慢性肝损伤模型中的肝内均可见PKH26标记阳性的细胞出现在肝小叶内,并且随时间延长阳性细胞数增加。PKH26标记阳性的细胞主要存在于沿纤维分布的血管内皮和肝小叶内的窦内皮,且血管内皮可见CD31/PK26双阳性细胞。结论:PKH26可以在体外成功标记大鼠内皮祖细胞,并在损伤肝内示踪。
- 刘峰刘志达武楠丛旭费然陈红松魏来
- 关键词：PKH26内皮祖细胞示踪
- 内皮祖细胞移植对大鼠肝硬化作用的研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）移植对四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）诱导的大鼠肝硬化的作用。方法本组38只SD大鼠中8只大鼠为正常对照，其余30只采用25％的CCl4／橄榄油灌胃制备肝硬化模型。再将肝硬化大鼠分为3组，每组10只。12周后直接处死的为肝硬化模型组，门静脉输入大鼠EPCs为EPCs移植组，经门脉输入生理盐水为移植对照组。移植4周后检测移植组和移植对照组大鼠肝组织胶原Ⅲ（collagen Ⅲ，COL Ⅲ）、平滑肌动蛋白（smooth muscle actin α，α—SMA）和Ki67的表达，检测外周血肝功能和血凝分析。结果肝硬化模型组大鼠肝脏体积增至正常时的2倍。EPCs移植组大鼠与肝硬化模型组比较，肝组织学活动指数（histological activity index，HAI）（F=75．062，P〈0．01），丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）（F=29．942，P〈0．05），门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）（F=16．618，P〈0．05）和总胆红素（total bilirubin，TBIL）（F=9．911，P〈0．05）水平降低，白蛋白（albumin，Alb）（F=4．944，P〈0．05）和Ki67（F=45．966，P〈0．01）水平升高，纤维化面积（F=25．025，P〈0．05）减少，α—SMA（F=7．86，P〈0．05）和COL Ⅲ（F=135．787，P〈0．01）表达降低；与正常肝脏相比，移植对照组HAI，ALT，AST和TBIL水平升高，Alb和Ki67水平降低，纤维化面积增加，α—SMA和COL Ⅲ表达升高（P〈0．05）。移植对照组大鼠凝血酶原时间延长，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论移植EPCs可以促进大鼠肝硬化的肝细胞增生，减轻肝纤维化程度。
- 刘峰刘志达武楠丛旭费然陈红松魏来
- 关键词：肝硬化干细胞
- 粒细胞集落刺激因子动员对大鼠内皮祖细胞体外扩增的影响被引量：2
- 2008年
- 背景：内皮祖细胞在缺血性疾病治疗应用中存在数量低的问题，许多细胞因子影响其动员效果和功能。目的：观察粒细胞集落刺激因子动员对体外扩增骨髓源性内皮祖细胞数量及功能的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-08／2008—03在北京大学人民医院肝病研究所完成。材料：SPF级健康成年SD雄性大鼠16只，随机分为动员组和对照组，8只／组。重组人粒细胞集落刺激因子为麒麟鲲鹏生物药业有限公司产品。方法：实验前动员组大鼠皮下注射经生理盐水稀释的重组人粒细胞集落刺激因子10ug／kg，2次，d，共5d。采用密度梯度离心法分别从两组大鼠骨髓获取单个核细胞，洗涤后按2×10^7／孔接种在包被大鼠纤连蛋白的6孔板上，采用贴壁法纯化得到内皮祖细胞。主要观察指标：骨髓单个核细胞集落数及细胞表型，骨髓源性内皮祖细胞贴壁情况及细胞表型，通过DiI-acLDL摄取、体外血管生成进行内皮祖细胞功能学鉴定，透射电镜观察细胞超微结构。结果：与对照组比较，动员组骨髓单个核细胞集落增多，CD45^＋／CD34^＋、CD133^＋和Flk-1^＋阳性率均明显升高（F=5．655～61．892，P〈0．05）。培养第7，9天与对照组比较，动员组骨髓源性内皮祖细胞贴壁数、CD45^＋／CD34^＋、CD133^＋和Flk-1^＋阳性率均明显升高（F=5．694～38．879，P〈0．05）。贴壁细胞F1TC—UEA-1／Dil—acLDL双荧光染色阳性率为90％，接种于Matrigel包被的培养板24h后形成毛细血管索样结构，胞质内有Weibel—Palade小体存在。结论：粒细胞集落刺激因子动员能增加骨髓源性内皮祖细胞的数量，并促进其分化、增殖功能。
- 刘峰刘志达武楠丛旭费然魏来
- 关键词：粒细胞集落刺激因子内皮祖细胞扩增
