艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2009ZX10004-705)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：文波陈红扈荣良管洁王文更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心军事医学科学院更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 整合缺陷型重组慢病毒载体构建及HCV重组假型慢病毒颗粒的制备与性状分析
- 2013年
- 为提高慢病毒载体应用的安全性及改进HCV新型颗粒疫苗的制备,首先对传统的慢病毒三质粒系统进行改造:将包装质粒pHR’CMVΔR8.2改造成整合缺陷型的包装质粒pHR’CMVΔR8.2D64E,并在体外感染实验验证其整合缺陷性;将转移质粒中的报告基因GFP替换成HCV的NS3基因,选用表达3种亚型(1a、1b、2a)HCV包膜E1E2的包膜质粒,用改造后的三质粒系统制备了3种亚型(1a,1b,2a)的假型丙型肝炎病毒(HCV)整合缺陷型慢病毒颗粒,并用Western blot方法确定了颗粒上包膜蛋白的表达,通过电镜可观察到浓缩后的HCV慢病毒颗粒结构,HCV慢病毒颗粒感染Huh7细胞后可观察到转基因NS3的表达。为安全高效的慢病毒载体的应用及HCV假型颗粒疫苗研发提供了新的技术路线。
- 管洁邓瑶文波陈红王文谭文杰
- 关键词：慢病毒载体
- 负链不分节段RNA病毒反向遗传系统中通用型真核表达载体的构建
- 2010年
- 本研究选择pVAX1作为供体载体,通过分子克隆方法,分别用人工合成的锤头型核酶、丁型肝炎核酶序列(用于获得转录后病毒基因组RNA的精确末端)和含有9个常用限制性酶切位点的linker序列(用于病毒基因组插入的多克隆酶切位点)取代真核表达载体pVAX1的多克隆酶切位点,将其改造成负链不分节段RNA病毒反向遗传系统的通用型表达载体。通过酶切鉴定和序列测定表明,pVAX1载体中插入的核酶及linker序列正确无误,并将CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA插入pVAX-R中,通过与辅助质粒的共转染成功拯救CTN株狂犬病毒,证明通用型真核表达载体构建成功,为快速建立负链不分节段RNA病毒反向遗传系统奠定基础。
- 黄莹唐青张守峰扈荣良
- 关键词：真核表达载体
