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一种简单高效扩增人杯状病毒ORF2区RT-PCR方法的建立及其意义: 2006年; The capsid protein encoded by ORF2 of human calicivirus(HuCV) expressed in the baculovirus expression system can self-assembled into virus-like particles(VLPs),which would be important for the development of improving diagnostic methods.The RT-PCR procedures routinely used to amplify the RNA polymerase region have usually been inefficient for amplification of ORF2,which would bring obstacle for the development of new diagnostic reagents.Through optimization of RT-PCR conditions,we established a simple and high performance RT-PCR method to amplify ORF2,and by which demonstrated a corresponding relationship between the genotype and the antigenic type.It provides conditions for developing diagnostic reagent which accommodates to diagnosis of HuCVs prevailing in China,and also provides the basis for studying the genetic variance and the pathogenesis of HuCV.; 谢华萍方肇寅章青欧阳晶Weiming ZhongXi Jiang; 关键词：人杯状病毒诺如病毒 ORF2 RT-PCR

中国七个地区1998-2005年急性腹泻住院患儿中星状病毒感染研究被引量：54: 2006年; 目的研究中国5岁以下腹泻住院患儿中星状病毒感染的流行病学特点,确定流行毒株血清型。方法选择国内7个地区收集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本,应用酶联免疫或PCR方法检测星状病毒,对星状病毒阳性标本应用RT-PCR方法分型并经测序确证。结果1998-2005年在7个地区的凋查点共收集1668份急性腹泻粪便标本,检测出星状病毒阳性标本91份,平均检出率为5．5％;病例全年均有发生,发病高峰主要集中在10月份到次年1月份;95％患儿年龄在2岁以下,其中以9-11月龄儿童发病最多,检出率为7.4％,12-17月龄、6-8月龄、0-6月龄儿童的检出率依次为6．1％、5.6％、5．6％。确定型别的49份标本中45份为HAstV-1型,1例为HAstV-3型,2例为HAstV-5型,1例为HAstV-8型。结论星状病毒是中国婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行毒株以1型为主,同时存在多个型别的散在流行。; 方肇寅孙亚萍叶新华王慧章青段招军Xi JiangDuncan SteeleRoger Glass; 关键词：星状病毒巢式逆转录聚合酶链反应流行病学

兰州地区2004-2005年度婴幼儿病毒性腹泻的病原学研究被引量：111: 2006年; 目的了解兰州地区主要四种腹泻病毒的流行病学特点。方法收集兰州大学第一医院儿科2004年7月至2005年6月5岁以下全部住院腹泻患儿400例的粪便标本,分别采用Dako公司酶免疫试剂盒检测轮状病毒、星状病毒、腺病毒,杯状病毒检测采用酶免疫法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法。对轮状病毒、星状病毒阳性标本用RT-PCR进行毒株分型鉴定。结果400份标本中四种病毒检测阳性率依次为轮状病毒47.3%、杯状病毒15.5%、星状病毒9.5%、腺病毒7.5%。其中有混合感染的病例数占13.5%。轮状病毒毒株G血清型分型结果为G2(34.4%)、G3(32.8%)、G1(1.1%)、不同型混合感染(5.8%)、未能分型(25.9%),P基因型分型结果为P[4](45%)、P[8](22.1%)、未能分型(32.9%)。G型与P型组合P[4]G2(43.6%)、P[8]G3(25.6%),P[4]G3(13.8%)、P[8]G2(3.2%)、P[4]G1和P[8]G1各1例。星状病毒血清分型结果为1型(57.8%)、3型(2.6%)、8型(2.6%)、未能分型(36.8%)。病毒性腹泻的高发季节轮状病毒最为明显为10-12月份。发病年龄主要为2岁以下婴幼儿,轮状病毒的高发年龄是6-23月龄。结论兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的病原复杂,轮状病毒仍是最主要病原,该年度轮状病毒的主要流行株为P[4]G2,与往年明显不同,病原混合感染比例较大,值得重视。; 叶新华金玉方肇寅孙亚萍谢华萍章青XiJiangDuncanSteeleRogerGlass; 关键词：轮状病毒病毒性腹泻婴幼儿

兰州地区2003—2007年急性腹泻住院患儿中札如病毒感染情况研究被引量：3: 2008年; 诺如病毒（NV）和札如病毒（SV）同属人类杯状病毒（HuCV），是仅次于轮状病毒（RV）引起儿童急性腹泻的主要病原。本研究对兰州地区急性腹泻住院患儿中SV感染情况、临床特点、基因多态性和遗传变异规律进行初步研究。; 叶新华金玉方肇寅程卫霞杨学梅黄湘谢华萍; 关键词：急性腹泻札如病毒

兰州地区婴幼儿轮状病毒和杯状病毒腹泻的研究被引量：17: 2005年; 目的研究兰州地区婴幼儿轮状病毒和杯状病毒腹泻的分子流行病学特点。方法2001年12月～2002年11月在兰州医学院第一附属医院儿科收集婴幼儿病毒性腹泻粪便标本244份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测轮状病毒抗原,阳性标本用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳方法进行基因分型;阴性标本用ELISA和RT-PCR进行杯状病毒病原检测。结果224份标本轮状病毒检出率为45.5%(111/244份),G分型中G3为58.6%,G1为18.0%,G2为4.5%,G9为2.7%,混合型为6.3%,11例未能分型。P分型中P[8]为61.0%,P[4]为7.3%,混合型为2.4%,14例未能分型。133份轮状病毒阴性标本杯状病毒检出率为15.8%,其中ELISA检测阳性率为11.3%,RT-PCR检测阳性率为9.0%。结论轮状病毒是兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的主要病原,2002年流行株为G3型,发现了G9型轮状病毒感染;杯状病毒也是引起兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的病原之一,应引起重视。; 董巧丽金玉章菁谢华萍方肇寅; 关键词：腹泻轮状病毒杯状病毒婴幼儿

我国广东、福建地区2000～2001年手足口病肠道病毒71型分离株的种系进化分析被引量：115: 2004年; 目的　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测我国广东、福建地区 2 0 0 0～ 2 0 0 1年手足口病 (HFMD)散发病例中的肠道病毒 71型 (EV71) ,进而通过扩增VP1节段的核苷酸序列 ,进行毒株的种系进化分析。方法　以肠道病毒特异引物对EV 1、EV 2进行RT PCR ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定为阳性的标本 ,进一步用EV71特异引物对 15 9S、16 2A进行RT PCR ,扩增的VP1节段经纯化后与测序载体pGEM T连接 ,转化大肠埃希菌DH5α ,筛选后测序。所得序列与我国深圳、上海、武汉地区的EV71流行株 ,中国台湾 1998年 4例HFMD暴发分离的EV71毒株 ,及来自美国、日本、匈牙利等国家地区的EV71毒株的核苷酸序列 ,用ClustalX 1 8和PHYLIP 3 5进行比对分析 ,构建种系进化树。结果　 2 5份标本检测EV71的阳性率为 2 0 % ,所得序列经种系进化分析 ,与肠道病毒 71型的其他毒株同源 ,与深圳 1998年HFMD散发分离的EV71毒株同源性为 94 % ,与上海 2 0 0 0年HFMD暴发分离株同源性为94 %～ 96 % ,与武汉 1987年HFMD病例中分离的毒株同源性为 91% ,而与国外EV71毒株同源性仅为82 %～ 84 %。结论　EV71是我国南方地区HFMD的主要病原之一 ;我国大陆地区的EV71毒株在种系进化上有较高的同源性 ;与我国台湾地区大部分分离株亦有 90 %～ 91%的核苷酸?; 林思恩章青谢华萍谢健萍何家鑫董巧丽方肇寅; 关键词：HFMD 肠道病毒71型种系手足口病进化分析分离株

2001～2007年兰州急性腹泻住院儿童轮状病毒感染的临床特点及分子流行病学研究被引量：23: 2008年; 目的了解兰州地区2001年12月-2007年6月,人类轮状病毒（Human Rotavirus,HRV）毒株的流行特点及变异情况,为疫苗的研发提供流行病学资料。方法收集兰州大学第一医院2001年12月-2007年6月≤5岁住院腹泻患儿的粪便标本1305份,采用酶联免疫吸附试验检测HRV,抗原阳性标本采用逆转录-聚合酶链反应进行血清G和基因P分型。结果1305份粪便标本中,HRV抗原阳性662份（50.7%）,其中G血清分型：G3型235份（35.5%）,G1型206份（31.1%）,G2型77份（11.6%）,G9型14份（2.1%）,G混合感染31份（4.7%）,未分型99份（15.0%）。P基因分型508份,依次为P[8]型279份（54.9%）,P[4]型73份（14.4%）,混合5份（1.0%）,P[6]型4份（0.8%）,未分型147份（28.9%）。2001-2004年度（2001年12月-2002年6月为2001-2002年度;2002年7月-2007年6月,以前一年7月-翌年6月为一个年度,下同）以G3型为优势流行株;2004-2005年度主要流行株为G2型（34.4%）,而2005-2007年度则以G1型为主要流行株。G血清型混合感染2001-2002年度占6.4%,2003-2004年度未检出,2004-2007年度分别占5.8%、3.2%、5.9%。检测结果显示,P基因型是以P[8]型为主,其中2001-2002年度、2003-2004年度分别占62.5%、33.3%,2004-2005年度则以P[4]（45%）占主导地位,其次是P[8]（22.1%）,2005-2007年度分别占75.6%、68.4%。2001-2007年HRV感染G血清型和P基因型的组合以P[8]G1（43.9%）、P[8]G3（28.2%）、P[4]G2（12.8%）为主。HRV腹泻发病季节主要在9-12月。6-23月龄为高发年龄段,平均发病月龄为（10.8±6.9）月龄。结论HRV是兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原,临床症状重于非HRV腹泻,流行毒株变异多样,不同G血清型之间的混合感染比例高于国内其它地区,值得重视。; 叶新华金玉方肇寅段招军李宇宁杨学梅程卫霞董巧丽黄湘; 关键词：人类轮状病毒腹泻分子流行病学

长春地区轮状病毒流行株VP7基因的遗传变异被引量：11: 2008年; A组轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的主要病原。目前没有有效的治疗药物,应用安全而有效的疫苗是控制重症腹泻的首要措施。对当地A组轮状病毒流行株的主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可以为疫苗的应用和开发提供有益的指导。利用ELISA方法对长春地区1999～2005年的腹泻患儿标本检测A组轮状病毒,RT-PCR方法对阳性标本进行G血清分型,发现长春地区2001年以后流行的轮状病毒以G3型血清为主。选取1999～2005年的G3型轮状病毒标本31份,对其VP7基因进行扩增、克隆、测序,经过计算机分析比对,31株G3型轮状病毒VP7基因核苷酸序列没有显著差异。同一流行季节的毒株具有较相似的遗传变异特征。在2003年轮状病毒流行季节内,有6株G3型分离株的VP7基因在碱基1038位置上出现一个碱基缺失。毒株发生在A、B、C三个高变区的碱基突变,位点相同或者位置临近。2002年以后毒株的基因突变增加,非高变区的碱基变异增加,这可能有助于维持G3型轮状病毒成为流行株。有规律的变异多发生在高变区,但是非高变区的非连续性变异的增加值得引起注意。; 王端可章青孙利炜王承训段招军Xi JiangBaoming Jiang方肇寅; 关键词：轮状病毒 RT-PCR VP7基因

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