国家自然科学基金(30871019)
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- GST-UCP2-N和GST-UCP2-C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备
- 2010年
- 以pMD18-T-hucp2为模板,用设计的两对特异性的引物PCR得到hucp2cDNA N端和C端的两断基因片段,然后将其插入到pGEX-5X-1表达载体上,重组质粒在PCR、双酶切、测序鉴定后,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21表达大量融合蛋白GST-UCP2-N(C),经GST亲和层析纯化蛋白.以该蛋白为抗原免疫ucp2基因敲除小鼠,western blot鉴定血清中抗体的反应性.实验证明成功构建了构建pGEX-5X-1-UCP-N(C)重组质粒,表达出了融合蛋白.并获得了抗血清.为进一步获得灵敏性更高,特异性更强的UCP2的抗体打下了基础.
- 白蕊郭亚楠卞桢刘丹青曾科
- SIRPα1转染对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响
- 2009年
- 目的:探讨外源性SIRPα1基因对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响及相关的分子生物学机制。方法:乳腺癌细胞株MCF-7本身不表达SIRPα1,将SIRPα1基因转染入MCF-7,用EGF刺激,Western blot法检测JNK蛋白及磷酸化的JNK蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染SIRPα1基因后,JNK蛋白的总量没有发生变化,而磷酸化的JNK减少,同时细胞增殖受抑,凋亡增加。SIRPα1胞内段的酪氨酸残基可被多种有丝分裂原活化而发生磷酸化。用EGF刺激转染SIRPα1质粒的MCF-7细胞,与未加刺激的相比,细胞凋亡无明显变化。结论:SIRPα1能促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,是一种候选的抑癌基因。
- 张璐瑶王晨曾科
- 关键词：乳腺癌细胞株MCF-7EGF细胞凋亡
