海南省自然科学基金(310045)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 人PSF蛋白的原核表达及分析鉴定
- 2011年
- PSF(polypyrimidine tract binding protein-associated splicing factor)蛋白是一种多功能的DNA/RNA结合蛋白,能够抑制原癌基因的表达,在人和小鼠中具有肿瘤抑制的作用。以人成纤维细胞总RNA为材料,利用PSF特异性引物通过RT-PCR的方法扩增得到PSF蛋白的编码序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-28-PSF,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE及免疫印记分析表明PSF能够在大肠杆菌中以可溶性形式表达。凝胶阻滞分析显示,原核表达的PSF融合蛋白在体外条件下能够与mVL30-1 RNA结合,表明PSF的原核表达产物很可能具有完整的生物学活性。为进一步研究PSF蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 王慧娟兰洋刘涛李灵
- 关键词：肿瘤原核表达
- 人PSF蛋白结合长非编码RNA的筛选及鉴定被引量：2
- 2011年
- 通过RNA亲和层析(RNA affinity chromatograph),4种可能与人PSF(human polypyrimidinetract-binding protein-associated splicing factor,hPSF)蛋白结合的长非编码RNA(1ong non-coding RNA,lncRNA)片段在人黑色素瘤细胞yusac细胞核RNA文库中被筛选得到.它们分别定位于人内源性逆转座子L1PA16、MER11C、非编码基因MALAT-1以及一个未知基因(unknown gene).紫外交联分析(UV cross-linking assay)证明在体外条件下这4种lncRNA片段均能与PSF蛋白结合;RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RNA-IP)进一步证实在体内条件下这4种lncRNA均能与hPSF发生相互作用.最后,半定量RT-PCR表明,未知lncRNA特异高表达于人黑色素瘤细胞,其余3种lncRNA在多种人类肿瘤细胞中的丰度均较正常细胞明显升高.
- 兰洋王慧娟刘涛李灵
