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细胞外信号调节激酶活化在慢性支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用(英文)被引量：22: 2007年; 本文旨在探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)在慢性支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(airwaysmooth muscle cells, ASMCs)增殖中的作用。建立慢性哮喘大鼠模型,用 ERK 激动剂表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和抑制剂 PD98059 干预慢性哮喘大鼠 ASMCs 的培养。采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、3H-thymidine (TdR)掺入法和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组织化学法检测ASMCs增殖情况,观察ERK信号通路对ASMCs 增殖的影响。RT-PCR 和 Western blot 检测 ERK mRNA 和 ERK1/2、磷酸化 ERK1/2 (p-ERK1/2)蛋白的表达。与正常对照组ASMCs 比较,慢性哮喘组ASMCs 的 G0/G1 期细胞所占比例明显减少,S+G2/M 期细胞所占比例增高;吸光度(A490)值、细胞DNA合成量和PCNA阳性表达量均明显增加,ERK mRNA、ERK1/2 蛋白、p-ERK1/2 蛋白的表达量以及ERK 活化率显著增高。经PD98059 干预之后,慢性哮喘组ASMCs 的 S+G2/M 期细胞所占比例、A490 值、细胞DNA合成量和PCNA阳性表达量明显降低,ERK mRNA、ERK1/2 蛋白、p-ERK1/2 蛋白的表达量以及ERK 活化率显著降低。经EGF 干预后,慢性哮喘组ASMCs 的 S+G2/M 期细胞所占比例、A490 值、细胞DNA合成量和PCNA阳性表达量进一步增高,而这一作用可以被PD98059 抑制。以上结果提示,慢性哮喘大鼠ASMCs 内源性增殖活性增加,ERK1/2 参与其增殖活性的调控,ERK 信号通路在哮喘气道重建的ASMCs 增殖调控中具有重要作用。; 白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望; 关键词：哮喘细胞外信号调节激酶平滑肌细胞增殖

ERK在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用被引量：9: 2008年; 目的:观察细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞的表达,以探讨ERK信号通路在气道平滑肌增殖中的作用。方法:病理图像分析慢性哮喘大鼠气道重塑,免疫组化法检测ERK和PC-NA在肺内表达,激光共聚焦显微镜分析ERK1/2、磷酸化ERK1/2和PCNA在气道平滑肌的共表达,免疫印迹和原位杂交检测气道平滑肌中ERK和PCNA蛋白以及mRNA的表达。结果:慢性哮喘大鼠有气道平滑肌层增厚,出现结构重塑。ERK和PCNA在肺内表达增强,同时在气道平滑肌上有ERK和PCNA蛋白与mRNA表达增加。结论:ERK可能是介导慢性哮喘气道重建中平滑肌增殖的重要信号通路之一。; 白晶刘先胜徐永健谢敏倪望陈士新; 关键词：哮喘有丝分裂素激活蛋白激酶类气道平滑肌细胞

细胞外信号调节激酶反义寡核苷酸对支气管哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞的影响: 2010年; 目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、正义（SODNs组）及错配ERKODNs（RODNs组）导入HASMCs,以10%非哮喘患者血清为对照（对照血清组）.采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、3H-TdR掺入法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术检测HASMCs的增殖,原位末端标记法和Annexin-V FITC PI双染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测ERKmRNA和ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白的表达.结果用ERK ODNs干预经哮喘血清致敏的HASMCs后,AODNs组S＋G2/M期细胞所占比例、吸光度（A490）值、细胞DNA合成量和PCNA蛋白表达量[分别为（14.21±1.21）%、（0.271±0.021）、（2811±182）cpm/106和（5.25±0.60）]均低于空白对照组[分别为（22.48±2.04）%、0.507±0.090、（3869±396）cpm/106和11.25±1.21]（F值分别为65.594、39.676、61.111、120.321,均P〈0.01）,AODNs组的凋亡指数和早期凋亡细胞百分率[分别为13.96±1.72和（9.17±0.47）%]均高于空白对照组[分别为5.37±0.05和（3.26±0.04）%],差异有统计学意义（F值分别为98.181和65.444,均P〈0.01）,AODNs组的ERK mRNA和ERK活化率[分别为0.43±0.06和（63±6）%]均低于空白对照组[分别为0.89±0.09和（87±8）%]（F值分别为78.043和87.288,均P〈0.01）.而正义和错配ERK ODNs没有上述作用.结论反义ERK可通过抑制ERK mRNA表达和翻译抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs的增殖,促进其凋亡,ERK信号通道可能对哮喘患者HASMCs增殖与凋亡具有重要的调控作用.; 白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望; 关键词：细胞外信号调节激酶类肌细胞平滑肌寡核苷酸类反义

细胞外信号调节激酶通路对气道平滑肌的功能调节被引量：2: 2006年; 细胞外信号调节激酶(ERK)通路是一种重要的细胞内信号转导通路,ERK是该通路的关键酶,气道平滑肌中有ERK1/2分布,ERK参与气道平滑肌表型改变、内膜下迁移、细胞的增殖与凋亡等多种功能。; 白晶徐永健刘先胜; 关键词：细胞外信号调节激酶通路气道平滑肌

Role of the extracellular signal-regulated kinase 1/2 signaling pathway in regulating the secretion of bronchial smooth muscle cells in a rat model of chronic asthma被引量：12: 2008年; 背景：尽管支气管的平滑肌房间(BSMC ) 在航线在长期的气喘期间改变起一个关键作用，这被认出， BSMC 怎么施加他们的煽动性的功能，很好没被理解。表明小径的细胞外的调整信号的激酶 1/2 (ERK1/2 ) 是在长期的气喘，而是它对由 BSMC 的分泌物的影响的一条重要发信号小径一直不是学习得好的。我们调查了在这研究在长期的气喘的一个老鼠模型由 BSMC 在分泌物上表明小径的 ERK1/2 的影响。方法：为了创造长期的气喘的一个老鼠模型，， Wistar 老鼠经历了 ovalbumim (卵) 注射和八星期吸入。BSMC 被孤立并且有教养的在试管内。表皮的生长因素， PD98059 和 ERK1/2 反察觉到 oligonucleotide 被用来探索表明小径的 ERK1/2 的角色。在 BSMC 的 P-ERK1/2 (phospho-ERK1/2 ) 的表示被西方的污点和反向的 transcriptase 聚合酶链反应(RT-PCR ) 分析。BSMC 的分泌物被连接酶的免疫吸着剂试金(ELISA ) 检测。结果：Phospho-ERK1/2 表示与控制相比在长期的气喘的老鼠的 BSMC 被增加。PD98059 禁止了 phospho-ERK1/2 蛋白质的表示，当有反感觉 oligonucleotide 的处理禁止了 P-ERK1/2 mRNA 和蛋白质的表示时。从长期的气喘组获得的 BSMC 分泌了生长因素的显著地更大的数量(转变生长因素( TGF )-beta(1),脉管的内皮生长因素( VEGF )和结缔组织生长因素( CTGF ))， cytokines (在激活之上调整了，表示房间、藏匿的正常 T ( RANTES )和 eotaxin )，并且细胞外的矩阵( fibronectin 和骨胶原我)与正常控制相比。在长期的气喘的组，而是反应的刺激分泌物组织的表皮的生长因素是更强烈的。PD98059 和反感觉 oligonucleotide 在长期的 ashmatic 老鼠由 BSMC 压制了分泌物。Antisense oligonucleotide 将近把 RANTES 的水平归结为正常控制的，当 PD98059 不能时。结论：这些结果建议 ERK1/2 发信号小径可以在长期的气喘的老鼠在 BSMC 的扩充分泌物起一个重�; XIE Min LIU Xian-sheng XU Yong-jian ZHANG Zhen-xiang BAI Jing NI Wang CHEN Shi-xin

慢性支气管哮喘模型大鼠气道中细胞外信号调节激酶1/2表达及活性变化的研究被引量：2: 2007年; 细胞外信号调节激酶（ERK）属于有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）家族，它是细胞内重要的信号传递分子，并有多种亚型，在平滑肌中主要有ERK1、ERK2（ERK1/2）两种，该通道在支气管哮喘（简称哮喘）病理生理发生和发展过程中的作用得到越来越多的关注。; 谢敏刘先胜徐永健张珍祥白晶倪望陈士新; 关键词：细胞外信号调节激酶慢性支气管哮喘活性变化气道有丝分裂原

一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法: 2007年; 目的应用呼吸曲线Penh值评估哮喘模型大鼠的气道高反应性,以探讨一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法。方法采用卵清白蛋白腹腔内注射致敏和雾化吸入激发的方法制备大鼠哮喘模型,用整体容积描记箱(体描箱)无创性记录呼吸曲线,推算Penh值并观察乙酰甲胆碱(Mch)刺激后的变化,然后用传统有创性气管插管的方法测定气道反应性,行肺组织病理切片染色。结果哮喘模型大鼠表现出气道高反应性,Mch刺激后呼吸频率和Penh值明显增加,根据Penh值的变化计算出的Mch负对数浓度和传统方法测定的气道反应性的定量指标呈明显正相关。结论体描箱呼吸曲线能够反应哮喘大鼠气道反应性的变化,可成为一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法。; 谢敏刘先胜徐永健白晶周志新倪望陈士新; 关键词：哮喘气道高反应性

ERK反义寡核苷酸对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 2007年; 许多研究提示，气道平滑肌细胞（AMSC）增殖与凋亡的异常在支气管哮喘（以下简称哮喘）气道高反应性、气道重建、不可逆气流阻塞等方面起重要作用，但有关其细胞内信号调控机制目前尚未阐明。细胞外信号调节激酶（extracellular-signal regulated kinase, ERK）通道是一种重要的细胞内信号转导通道，在AMSC中，; 白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望; 关键词：气道平滑肌细胞增殖反义寡核苷酸 ERK 细胞外信号调节激酶

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响被引量：14: 2010年; 目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均<0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均<0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均<0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。; 白晶刘先胜徐永健谢敏倪望; 关键词：细胞外信号调节蛋白激酶气道平滑肌细胞细胞周期哮喘

ERK对慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响被引量：4: 2010年; 目的：探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）通路在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）凋亡中的作用及其机制。方法：30只Wistar大鼠分为正常对照组（A组）和慢性哮喘组（B组），用原位末端标记法和Annexin—V FIT CPI双染色法观察ASMC凋亡，免疫组织化学法检测bcl-2和bax的表达，Western blot检测caspase-3蛋白的表达，并用ERK激动剂表皮生长因子（EGF）和抑制剂PD98059干预两组ASMC，观察上述指标的变化。结果：与正常对照组ASMC比较，慢性哮喘组ASMC凋亡指数、早期凋亡细胞百分率明显下降。经PD98059干预之后，慢性哮喘组ASMC的凋亡指数与早期凋亡细胞百分率、bax蛋白表达量和caspase-3蛋白含量明显增高，bcl-2蛋白表达量明显降低。经EGF干预之后，慢性哮喘组ASMC凋亡指数与早期凋亡细胞百分率进一步下降，而这一作用可以被PD98059所抑制。结论：慢性哮喘组大鼠ASMC内源性增殖活性增加的同时，伴有凋亡活性下降。ERK1／2参与慢性哮喘ASMC凋亡调控，其机制与bcl-2家族和caspace-3有关。; 白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望; 关键词：哮喘 ERK 气道平滑肌细胞凋亡

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