国家自然科学基金(30871057)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- ELISA方法在基础医学研究中的应用及注意事项被引量：7
- 2011年
- 1971年瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann首次建立了酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA）方法,用于定量检测家兔血液中的IgG。
- 徐瑞霞时那宋莉张燕婉叶珏孟宪敏
- 关键词：酶联免疫吸附测定基础医学研究
- 人类p93基因转基因小鼠模型的建立及功能初探
- 2012年
- 目的 探讨心肌特异性表达的新激酶基因p93对心脏发育的影响.方法 构建携带人心肌特异启动子的α-MHC-p93转基因质粒,以显微注射法获得p93转基因首建鼠.对转基因小鼠进行形态学观察及血清水平检测.结果 成功构建了携带有人p93基因的真核表达载体α-MHC-p93,获得首建鼠7只.经繁育共获得F1、F2代转基因鼠234只,筛选出转基因阳性鼠4只,其中F1代3只,F2代1只.小鼠心脏大体形态学检测未见房室间隔缺损现象.血清学检测结果显示：p93转基因阳性鼠血Ca2＋水平明显高于正常对照组[ （28±1）mg/L比（26±1）mg/L,P＜0.05],差异有统计学意义（P＜0.05）；血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平低于正常对照组[（624.7±268.1）U/L比（1229.8±532.4）U/L,P＜0.05]；血清乳酸脱氢酶（LDH）水平及心脏质量指数（HMI）与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论 成功建立了人p93基因的转基因小鼠模型.单一转入p93基因没有造成实验动物的房室间隔缺损及心肌肥大.
- 田野郑晓静宋莉孟宪敏
- 关键词：转基因鼠心肌酶血清水平
- MicroRNA与心脏疾病被引量：1
- 2010年
- 微RNA(m icroRNA,m iRNA)是小分子非编码调控RNA,含有大约22个核苷酸,可和靶基因mRNA的3′非编码区相互配对结合,在转录后水平负调控靶基因的表达.微RNA调控细胞的生长、代谢、分化和凋亡,进而参与生物体的生长发育.研究表明,微RNA参与人类多种生理和病理过程的调控.最近几年,对微RNA表达调控机制及其调控相关疾病的研究取得了诸多显著性的进展,心脏疾病相关微RNA更加成为研究的热点.此外,一系列基于微RNA治疗心脏疾病的策略方法,例如用反义寡核苷酸抑制微RNA和微RNA补偿的方法,也取得了突破的成果.总之,微RNA的研究及应用将为心脏疾病的诊断和治疗提供新的途径.
- 王林王慧孟宪敏
- 关键词：微RNA基因沉默心脏疾病
- 大鼠nelin基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究
- 2010年
- 目的构建大鼠nelin基因干扰质粒并对其进行体外抑制效果验证,为研究nelin在心脏发育、心肌肥厚、心衰及其它心脏疾病中的作用提供有效的研究工具。方法提取大鼠心肌组织RNA,逆转录为cDNA,设计合成含BamHI和EcoRI酶切位点的引物,以大鼠cDNA为模板PCR扩增获得nelin基因,定向克隆入pEGFP-N1-3FLAG载体,测序验证。以克隆得到的大鼠nelin基因为模板,设计合成候选干扰序列,亚克隆至pGCSIL-U6载体,获得干扰质粒。以nelin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染HEK293T细胞,WesternBlot方法检测干扰效果。结果成功克隆了大鼠nelin基因并构建了nelin基因重组表达载体pEGFP-N1-3FLAG-rNelin。设计构建的4个干扰质粒(靶位点分别为+370-388位,+376-394位,+545-563位,+1206-1224,命名为pGCSIL-U6-nelin/siteⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)均可显著降低nelin基因的表达,尤以靶向(+370-388位)位点即pGCSIL-U6/nelin-siteI质粒的干扰效果最佳。结论本实验构建的大鼠nelin基因特异性干扰质粒能从蛋白水平上高效特异地抑制ne-lin基因表达,为进一步开展其功能研究奠定了基础。
- 王慧王林宋莉叶珏孟宪敏
- 关键词：RNA干扰SHRNA重组表达质粒体外抑制酶切位点
- 人心肌特异表达基因Nelin蛋白的血清水平测定及其意义被引量：1
- 2010年
- 目的探讨Nelin蛋白在心血管病患者和正常对照血清表达水平的差别及其意义。方法使用自制的一株Nelin单克隆抗体(MA-H409H5),建立ELISA法标准曲线。通过检测灵敏度(最小检出量)、精确度(批内、批间变异系数)、回收率等以优化实验反应条件,并以此方法测定了580例人血清Nelin蛋白浓度。结果直接ELISA法检测Nelin蛋白的最小检出量为7.8ng/ml,标准曲线在7.8～250.0ng/ml范围内线性良好(r>0.99)。精确度测定:平均批内变异系数为4.78%,平均批间变异系数为9.56%。测得回收率为(100±5)%。580例人血清中均可检测到Nelin蛋白的表达,其中正常对照组为(9.34±3.07)μg/ml,冠心病组为(8.57±2.76)μg/ml,该两组Nelin蛋白含量相比有显著性差异(P<0.05),而其他各心脏病组与正常组相比均无显著性差异。结论成功建立了人血清Nelin蛋白的ELISA测定法,该方法敏感、特异、可靠。正常对照组和各心血管病患者组均有Nelin蛋白表达,但冠心病组明显低于正常对照组,提示Nelin基因的表达水平可能与冠心病有一定的关系。
- 时娜宋莉刘冬青王林丁金凤孟宪敏
- 关键词：基因心血管病
- 腺病毒过表达TNNI3K基因对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度的影响被引量：2
- 2011年
- 目的检测TNNI3K基因过表达对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度变化的影响,为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能、心肌肥厚、心衰及其它心脏疾病中的作用提供了可靠有效的研究模型。方法恒压Langedoff灌流装置逆向灌流法分离成年大鼠心肌细胞,之后对该心肌细胞进行逐级复钙。然后,将心肌细胞接种于改良的M199培养基中。分别感染Ad.GFP病毒和Ad.TNNI3K病毒,24小时后,以IonOptix单细胞可视化动缘系统检测心肌细胞肌丝钙敏感度。结果成功分离培养了成年大鼠心肌细胞,并在该细胞中成功过表达了TNNI3K基因。钙敏感度测定结果表明,TNNI3K基因能够增强心肌细胞肌丝钙敏感度。结论在本实验成功分离培养的成年大鼠心肌细胞中以腺病毒载体过表达TNNI3K基因,可增强心肌细胞肌丝的钙敏感度,该模型为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能中的作用及机制奠定了基础。
- 王林王慧叶珏宋莉孟宪敏
- 关键词：腺病毒感染
