国家自然科技资源平台项目(2005DKA21100)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：刘爱红罗建勋殷宏李有全关贵全更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科技资源平台项目国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫内转录间隔区基因序列的测定与系统进化分析被引量：2
- 2008年
- 自试验感染吕氏泰勒虫（渭源株）和尤氏泰勒虫（隆德株）绵羊的血液中纯化虫体，提取虫体基因组DNA，通过PCR扩增内转录间隔区（ITS1-5．8S-ITS2 rRNA）基因，然后进行测序，构建了系统发生树并与GenBank中各种动物梨形虫的ITS1-5．8S-ITS2 rRNA基因序列进行比较。结果显示，这两种泰勒虫的ITS1-5．8S-ITS2 rRNA基因大小为817-842bp，同源性高达96．8％，分布在同一大枝上。通过比较ITS基因的同源性，尤其是ITS2基因的变异性，可以区别这两种泰勒虫与其他梨形虫。
- 牛庆丽邱家祥关贵全马米玲刘志杰党志胜刘爱红高金亮任巧云李有全刘军龙白启罗建勋殷宏
- 关键词：系统进化分析
- 微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析
- 2009年
- 按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。
- 刘军龙关贵全李有全马米玲刘爱红任巧云殷宏罗建勋
- 关键词：微小牛蜱原核表达
- 小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2008年
- 根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%。将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别。
- 赵金国曾巧英殷宏刘爱红李有全罗建勋
- 关键词：克隆原核表达
- 小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。
- 赵金国刘爱红殷宏罗建勋
- 关键词：真核表达毕赤酵母
- 微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2008年
- 从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bm91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物。采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoRⅠ酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91。再次测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83ku的重组Bm91蛋白。
- 王玙罗建勋马米玲关贵全李有全刘爱红任巧云刘军龙殷宏
- 关键词：微小牛蜱分泌表达
