为了建立同步检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体感染的多重PCR方法,根据GenBank上具有属间特异性的布鲁菌.Bp26基因、鹦鹉热衣原体23S rRNA基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计1对特异性引物。通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立了能够同时检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体的多重PCR方法。该方法具有较好的特异性和可重复性,对3种基因单重PCR检测敏感性均达到3.1×10~2拷贝·反应^-1,对3种病原基因同步检测的敏感性能达到3.1×10~3拷贝·反应^-1。利用该方法对采自不同流产牛的抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,检测到布鲁菌感染阳性样品53份,鹦鹉热衣原体感染阳性样品2份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,且检测到布鲁菌和鹦鹉衣原体混合感染阳性样品2份,布鲁菌和贝纳氏柯克斯氏体混合感染阳性样品2份,尚未检测到3种病原混合感染的阳性样品。结果表明,建立的多重PCR方法可以用来对奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体进行同步、快速、灵敏的检测。
【目的】了解新疆地区牛病毒性腹泻（BVD）的流行状况,【方法】采用RT-PCR方法对从新疆16个不同地区采集的样品进行BVD病毒5＇-UTR扩增,对扩增出的序列进行测序,构建系统遗传进化树和遗传变异分析。【结果】566份样品中,扩增出21份阳性样品,平均阳性率为3.71℅。通过对分离株序列的同源性比对分析,17株为BVDVI型,4株为BVDVⅡ型。经对PCR扩增阳性样品进行细胞传代,有7株为致细胞病变型（CP）,14株为非致细胞病变型（NCP）毒株,所测得的病毒滴度为1.04×103~6.02×108TCID50/0.1 m L,21株分离病毒对BVDV阳性血清的中和效价为1：21~1：25。【结论】BVD在新疆地区均不同程度的发生和流行。研究的成果,为BVD的有效防控提供了技术资料。
为建立同步检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,根据GenBank上公布的布鲁氏菌Bp26基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计一对特异性引物,分别扩增出219 bp和130 bp的目的片段,通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立起了能够同步快速检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,该方法具有较好的特异性、可重复性和较高的灵敏性。利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,共检测到布鲁氏菌感染阳性样品53份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,混合感染阳性样品2份,阳性检出率分别为30.8%、5.8%、1.2%。初步临床应用结果表明,该方法可用来安全、同步、快速、灵敏地对布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体进行检测。
