福建省卫生厅青年科研基金(XH200801)
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- HBV X基因在HL-7702肝细胞中的表达促进细胞凋亡并上调HSP70基因的表达
- 2013年
- 目的研究乙型肝炎病毒X(HBV X)基因在肝细胞HL-7702中的稳定表达对其细胞凋亡和表达HSP70的影响,并探讨二者之间的关联。方法将已构建好的HBV X基因真核表达载体pcDNA3-X转染人肝细胞HL-7702,48h后经G418筛选出稳定表达HBV X基因的肝细胞株(L02/HBx)。RT-PCR、蛋白印迹实验鉴定L02/HBx细胞HBV X基因的稳定表达。以转染空质粒肝细胞(L02/pcDNA3)为对照,运用流式细胞分析、TUNEL分析和DNA ladder观察检测L02/HBx细胞凋亡情况。基因芯片技术筛查L02/HBx和L02/pcDNA3两组肝细胞差异表达的凋亡相关基因,并运用蛋白印迹实验技术对差异表达的HSP70基因进行蛋白水平验证。结果 RT-PCR和蛋白印迹实验显示,L02/HBx细胞中有HBV X基因mRNA和蛋白的表达。流式细胞和TUNEL分析显示,L02/HBx细胞组的凋亡率显著高于对照组L02/pcDNA3,DNA ladder可观测到L02/HBx的凋亡现象,而对照组未观测到。两次基因芯片结果筛查出L02/HBx细胞组与对照组差异表达基因HSP70,蛋白印迹实验进一步证实HSP70在L02/HBx细胞中的蛋白表达显著高于未表达X基因的肝细胞组。结论 HBV X基因在肝细胞HL-7702中的表达促进了肝细胞的凋亡,上调了肝细胞中HSP70基因的表达,从而在乙型肝炎病毒致肝细胞癌变的过程中起重要作用。
- 陈红英陈治新王小众
- 关键词：肝细胞乙型细胞凋亡细胞肝细胞
- 乙肝病毒X蛋白对肝星状细胞的增殖及其表达TGFβ1和CTGF的影响
- 2013年
- 目的研究乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝星状细胞(HSC)增殖的影响及其可能的分子机制。方法运用分子生物学方法构建稳定表达HBV X基因的HL-7702肝细胞株(L02/x)。RT-PCR、Western blot鉴定L02/x细胞HBV X基因的稳定表达。将HSC细胞分别与L02/x、转染空质粒和未转染的肝细胞共培养36h,分别命名为HSC/x、HSC/ctr和HSC/NC。CCK-8法检测各组HSC增殖,Real-time PCR法检测在HSC增殖中起重要作用的TGFβ1和CTGF基因在各组HSC中的mRNA表达。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,L02/x细胞中有HBV X基因mRNA和蛋白的表达。CCK-8法检测显示,HSC/x的增殖(0.737 7±0.014 2)显著高于HSC/ctr(0.497 0±0.008 5)和HSC/NC(0.491 3±0.018 6),差别具有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR显示,HSC/x细胞中的TGFβ1和CTGF mRNA相对表达量(3.146 1±0.070 5,2.982 9±0.031 5)均显著高于HSC/ctr(1.004 6±0.004 0,1.022 2±0.062 7)和HSC/NC(1.000 0±0.000 0,1.000 0±0.000 0),差别具有统计学意义(P均<0.01)。结论肝细胞中表达的HBV X基因可以上调HSC细胞TGFβ1和CTGF基因的表达,促进共培养的HSC增殖。
- 陈红英陈治新王小众
- 关键词：病毒蛋白质类星形细胞即早蛋白质类
