江苏省自然科学基金(BK2007107)
- 作品数：21 被引量：110H指数：8
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- 骨髓间充质干细胞修复退变椎间盘中营养和分化效应的变化被引量：8
- 2009年
- 目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植在椎间盘退变修复过程中营养效应与类髓核分化效应的变化。方法用针吸髓核法建立兔的椎间盘退变模型，采取体外细胞培养技术，培养MSCs，并用含有绿色荧光蛋白（GFP）标记的腺病毒转染使之携带有GFP，在造成退变模型2周后以5×10^6个细胞／ml的浓度植入手术节段的椎间盘内。1、2、4、8周末用间接免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜观测MSCs表达的转化生长因子（TGF）-β1、胰岛素样生长因子（IGF）-1和低氧诱导因子（HIF）-1α、Ⅱ型胶原等在不同时间点上的表达及定量分析。结果MSCs表达的TGF—β1、IGF-1在2周左右达到高峰，分别为（22．68±6．83）％、（35．67±6．56）％，之后开始降低；HIF-1α、Ⅱ型胶原在8周中均呈上升趋势，8周最高，分别为（55．35±14．06）％、（37．23±9．53）％，2—4周过程中上升最明显。结论早期（2周时）MSCs以发挥营养效应为主，后期（4周后）以发挥类髓核分化效应为主。
- 严慧深吴小涛王运涛邵建树曹烨鲍军平张磊
- 关键词：椎间盘退变骨髓间充质干细胞
- GFP标记干细胞修复椎间盘退变中的示踪研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨绿色荧光蛋白(GFP)示踪时效及GFP标记的骨髓间充质干细胞(MSCs)在移植后参与退变修复过程中的细胞增殖情况。方法使用针吸髓核法建立兔的椎间盘退变模型,体外培养MSCs,并用含有绿色荧光蛋白标记的腺病毒载体(Adeno-XTM-GFP)转染,成为GFP标记的MSCs(GFP-MSCs),于造模2周后植入造模的椎间盘内。在移植后第2、4、6、8周用激光共聚焦显微成像技术,观察MSCs的增殖情况,对比GFP本身荧光和免疫荧光的示踪时间。结果非免疫荧光组GFP本身荧光强度能够持续到4周,后较微弱甚至难以辨别;免疫荧光组用FITC荧光二抗标记的GFP-MSCs在8周内都能够持续稳定的显现荧光,4个时间点GFP-MSCs的阳性率的可信区间分别是:2周(14.64±2.05)%;4周(21.85±2.45)%;6周(31.03±4.03)%;8周(36.37±4.42)%。结论GFP-MSCs在椎间盘微环境中能够稳定增殖。若示踪研究需要持续超过4周,则应对GFP行免疫荧光染色,可以使有效示踪时间持续至少8周。
- 严慧深吴小涛王运涛邵建树曹烨鲍军平
- 关键词：椎间盘退变干细胞移植绿色荧光蛋白
- 兔退变椎间盘模型中髓核细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的:研究细胞凋亡在兔退变椎间盘模型中的作用。方法:用针刺法制作兔退变椎间盘模型,磁共振检查鉴定模型的建立,HE染色计数髓核细胞,TUNEL法染色标记凋亡髓核细胞,并通过激光共聚焦显微镜计数凋亡细胞比例,RT-PCR检测Bax和Bcl-2凋亡相关基因的表达水平。结果:兔退变模型建立成功,退变组髓核细胞计数低于正常组,凋亡细胞比例高于正常组,退变组抗凋亡基因表达低于正常组,凋亡基因水平高于正常组。结论:凋亡在椎间盘退变模型中存在,并起重要作用。
- 樊守刚吴小涛王运涛李果
- 关键词：椎间盘退变凋亡激光共聚焦显微镜
- 经表面修饰的β-TCP对BMSCs细胞增殖及分化作用的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究三种材料,材料一:-磷酸三钙支架(-TCP);材料二:明胶/低结晶度羟基磷灰石涂层--磷酸三钙支架(gel/lc-HA--TCP);材料三:明胶/高结晶度羟基磷灰石涂层--磷酸三钙(gel/hc-HA--TCP)。三种材料的细胞毒性及兔骨髓基质细胞(BMSCs)与材料共培养增殖的情况。方法取兔股骨骨髓腔细胞,进行贴壁培养BMSCs。在成骨诱导液中诱导BMSCs。将诱导后的BMSCs与三种支架材料在培养板内共培养1、3、5、7、9d。采用形态学观察、MTT法及ALP检测试剂盒等方法检测材料的BMSCs细胞毒性及BMSCs细胞在材料表面的增殖和分化能力。结果光镜及电镜下观察各组无显著差异。细胞毒性在0-1级。与细胞共培养,-TCP组在第7、9天与阴性对照组差异有统计学意义。ALP检测,-TCP组在第7、9天与阴性对照组差异有统计学意义(P<0.05),gel/lc-HA--TCP在第9天与阴性对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论新型明胶/高结晶度羟基磷灰石涂层--磷酸三钙支架和明胶/低结晶度羟基磷灰石涂层--磷酸三钙支架与BMSCs生物相容性好,适合作为支架材料负载BMSCs构建组织工程骨。
- 明敏吴小涛王运涛董寅生张艳孙倩
- 关键词：骨髓基质细胞羟基磷灰石表面修饰
- 髓核细胞修复椎间盘退行性变的研究进展被引量：18
- 2009年
- 目的综述髓核细胞修复椎间盘退行性变的研究进展。方法查阅近年有关髓核细胞修复椎间盘退行性变的国内外相关文献,进行回顾及综合分析。结果椎间盘髓核细胞不仅是残留脊索细胞,其对于整个椎间盘功能的维持起到重要作用,生物治疗对退变椎间盘的修复一方面试图改善髓核细胞的生存微环境,另一方面通过补充髓核细胞数量,包括移植干细胞分化为类髓核细胞来缓解椎间盘退行性变。结论基于髓核细胞或干细胞来源类髓核细胞的细胞移植技术为扭转椎间盘退行性变提供了可能。
- 王锋王运涛吴小涛
- 关键词：椎间盘退行性变细胞移植髓核细胞
- 血小板源性生长因子及胰岛素样生长因子对大鼠腰椎间盘退变的影响被引量：1
- 2009年
- 目的：探讨血小板源性生长因子（PDGFs）及胰岛素样生长因子（IGFs）对大鼠椎间盘退变（IDD）的影响。方法：36只成年健康SD大鼠,随机分为PDGFs实验组、PDGFs加IGFs实验组及阴性对照组3组,通过手术方法建立IDD模型。在术后不同时期对3组分别注射PDGFs、PDGFs加IGFs及生理盐水,于造模后1个月和2个月每组分别处死6只大鼠,完整取出L3-4椎间盘测量蛋白多糖含量,取L4-5椎间盘使用免疫组化法检测Ⅱ型胶原含量,取L5-6椎间盘使用流式细胞仪检测各组大鼠椎间盘细胞的凋亡情况。结果：造模当日和术后1个月开始注射试剂的3组椎间盘蛋白多糖含量、Ⅱ型胶原含量及细胞凋亡率差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论：PDGFs对大鼠IDD有预防和治疗作用,PDGFs与IGFs联用有协同作用。
- 周涛吴小涛
- 关键词：椎间盘退行性变血小板源性生长因子胰岛素样生长因子
- 骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合效果及示踪的实验研究被引量：3
- 2009年
- [目的]观察骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合的影响,并为干细胞的标记示踪提供实验依据。[方法]采用贴壁分离筛选法获取大鼠的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),用超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)和DiI(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate)对其标记。39只8周龄雄性SD大鼠随机分为两组,实验组21只,对照组18只。实验组在骨隧道内腱-骨结合面注入含双标的BMSCs和Pluronic F-127载体,对照组只注入载体,术后2、4、8周进行生物力学评估愈合效果,实验组2、4、8周组织冰冻切片荧光显微镜和手术后即刻、3、7d行7.0TMR示踪移植的BMSCs。[结果]SPIO、DiI能有效标记干细胞。实验组2、4、8周荧光显微镜观察在腱骨界面有DiI标记的阳性细胞存在。7.0TMR未能在实验组腱骨界面观察到明显信号改变。生物力学最大拔出载荷实验组和对照组在术后2周无统计学差异,在4、8周实验组显著高于对照组(P<0.05)。[结论]移植的骨髓间充质干细胞可以促进骨隧道内腱骨结合部的早期愈合,DiI能有效标记示踪干细胞,SPIO能有效标记干细胞,但在该实验模型中7.0TMR可能不能活体示踪磁粒子标记的干细胞。
- 董佩龙吴小涛李永刚张绍东潘永飞曹烨严慧深
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨隧道超顺磁氧化铁DII示踪
- 兔骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养后的营养效应和类髓核分化效应被引量：14
- 2009年
- 目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(BMMSCs)与髓核细胞(NPCs)共培养时BMMSCs的营养效应和类髓核分化效应及其动态变化规律。方法:应用1月龄新西兰大白兔的骨髓和髓核进行BMMSCs及NPCs的分离培养与鉴定,建立3个细胞培养组,BMMSCs与NPCs共培养组(实验组),BMMSCs单独培养组和NPCs单独培养组作为对照组。在培养的不同时间点(3、6、9、12、15、18、21d)分别检测细胞培养上清液中转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍化生长因子(PDGF)的含量变化及BMMSCs与NPCs的增殖能力,采用RT-PCR法检测培养不同时间点BMMSCs与NPCs的蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型胶原蛋白mRNA的表达变化。结果:分离培养的两种细胞经鉴定分别为BMMSCs及NPCs。从第3天开始的各个时间点,实验组上清液中TGFβ1、PDGF的含量较两对照组明显增高(P<0.05),且随时间的延长而逐渐增高,第15天达最高,TGFβ1、PDGF分别达815.81±25.69pg/ml和494.28±20.01pg/ml,此后第18d、21d逐渐下降。实验组细胞DNA含量在各个时间点上均较两对照组明显升高(P<0.05)。从第3天开始的各个时间点,实验组NPCs的蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型胶原mRNA的表达较对照组高(P<0.05);同时从第15天开始至第21天,实验组BMMSCs的蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型胶原mRNA的表达较对照组高(P<0.05)。结论:BMMSCs与NPCs共培养时BMMSCs可通过表达TGFβ1、PDGF等细胞因子发挥其营养效应,激活NPCs,促进其增殖及细胞外基质的合成;在共培养后期,BMMSCs在髓核局部微环境下,可发挥其类髓核分化效应,开始合成蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型胶原蛋白。
- 邵建树吴小涛王运涛曹烨严慧深
- 关键词：骨髓间充质干细胞髓核细胞共培养营养效应
- 单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察被引量：14
- 2010年
- 目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况。结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P<0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。
- 王锋吴小涛王运涛邵建树张明
- 关键词：椎间盘退行性变髓核细胞甲苯胺蓝免疫细胞化学
- 干细胞移植延缓椎间盘退变及磁共振示踪研究被引量：10
- 2008年
- 目的:评价超顺磁性氧化铁纳米粒子标记的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)在椎间盘退变早期植入椎间盘后细胞外基质的表达情况,并用磁共振进行干细胞示踪。方法:采取体外细胞培养技术,体外纯化扩增兔BMMSCs,并用氧化铁纳米粒子进行标记,于退变手术当时植入手术节段椎间盘内。分别于2、4、6、8周用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定Ⅱ型胶原的含量变化,用磁共振扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪。所得数据进行统计学处理。结果:8周内实验组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量明显较模型组高,差异有统计学意义,但与正常组比较差异无统计学意义。结论:兔BMMSCs移植可以延缓甚至阻止髓核退变。
- 鲍军平吴小涛王运涛张福勇朱磊
- 关键词：椎间盘退变髓核骨髓间充质干细胞干细胞移植超顺磁性氧化铁
