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李树民
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- 所属机构:中国人民解放军
- 所在地区:江苏省 南京市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:吉林省科技发展计划基金
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- 目的:研究重组免疫毒素LHRH -PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性,并观察由此产生的细胞毒性作用。方法:ELISA方法检测LHRH- PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的高度特异性、饱合性及其与时间的关系;LHRH- PE40由LHRH受体介导对Hela细胞产生细胞毒作用进行光、电镜观察。结果:LHRH -PE40与Hela细胞表面受体的结合与正常鸡胚成纤维细胞的结合相比有显著意义(P<0. 01);LHRH- PE40与LHRH竞争LHRHR的OD值和TSH相比有显著意义(P<0. 01);光镜观察,LHRH- PE40对Hela细胞作用明显而对正常鸡胚成纤维细胞几乎没有作用;电镜观察,LHRH -PE40使Hela细胞表面出现凋亡征象。结论:与其他正常组织的细胞相比, Hela细胞膜表面LHRH受体分布呈过表达状; LHRH -PE40与细胞表面LHRH受体的结合具有高度特异性、饱和性; LHRH -PE40对细胞的作用由LHRHR介导,并且只对LHRHR阳性细胞产生毒性作用。
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- MALDI-TOF质谱技术及Biotyper数据库在养殖场空气微生物鉴定中的应用被引量:8
- 2014年
- 以16SrRNA测序法为标准方法,利用MALDI-TOF质谱技术及Biotyper数据库对某猪场210株空气分离株进行鉴定及准确率分析。结果显示91.0%的菌株被准确鉴定到种水平,95.7%被准确鉴定到属水平。研究表明MALDI-TOF质谱技术可以快速准确检测空气微生物,为养殖场环境质量监测提供了新的技术支持。
- 李楠刘文森刘林娜郝镯李树民孟轲音何扬万忠海王承宇李吉平
- 关键词:空气微生物
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- 2015年
- 目的盐酸多巴胺、硫酸沙丁胺醇和盐酸莱克多巴胺是β-肾上腺素受体激动剂,该研究目的是建立一种用于这3种成分的检测方法,以防止人类食用含有该残留成分的畜产品引发食物中毒。方法实验选用SHIMADZU ODS C18反相色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以含10%乙腈的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(p H=2.50)为流动相A、含50%乙腈的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(p H=2.50)为流动相B,在0~6 min内由A液变为B液进行梯度洗脱。激发波长(λex)为280 nm,发射波长(λem)为309 nm,对3种β-肾上腺素受体激动剂进行分离和检测。结果盐酸多巴胺、硫酸沙丁胺醇和盐酸莱克多巴胺分别在5~200、5~200和10~200 ng范围内呈良好的线性关系,其相关系数R2分别为0.999 3、0.999 9和0.999 2,其标准回收率分别为(101.50±3.42)%、(99.46±2.93)%和(101.83±4.12)%,变异系数为3.37%、2.95%和4.05%。样品的回收率分别为(60.74±1.05)%、(96.30±0.62)%和(91.02±1.28)%,变异系数分别为1.72%、0.64%和1.40%。盐酸多巴胺、硫酸沙丁胺醇和盐酸莱克多巴胺的最低检测限分别为0.1、0.125和5 ng。结论该方法简单,快速,准确,可用于实验室动物性食品中残留药物的常规检测。
- 张仁诚李吉平郝镯刘林娜李树民李楠刘全周莉
- 关键词:HPLC盐酸多巴胺硫酸沙丁胺醇荧光检测
- 抗ICAM-1单链抗体基因的克隆及序列分析被引量:1
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- 应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 ICAM- 1单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 F12中 ,扩增出抗体VH和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆到 p MD18- T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 74 4 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排鼠抗体可变区基因特征。 VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (B)和轻链к
- 李月红张国力岳玉环邱叶峰李树民吴广谋朱平
- 关键词:基因克隆
- 重组胸腺素α_1 pMAL-C2x-Tα_1/TB1工程菌三角摇瓶培养条件的优化
- 2012年
- 目的对重组胸腺素α1pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌的培养条件进行优化。方法在摇瓶培养条件下探讨工程菌的生长和表达规律,对pMAL-C2x-Tα1/TB1菌种的培养基装量、接种量、诱导剂异丙基硫化半乳糖苷(IPTG)加入时间和浓度、诱导时间进行了实验和优化。结果由摇瓶培养获得的数据表明pMAL-C2x-Tα1/TB1最优培养条件为:10%接种量、100 mL LB培养基、37℃培养,接种后3 h,入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导4 h后目的蛋白表达量最高。结论优化的培养条件为菌种的发酵工艺奠定了基础。
- 刘中禄陶翠兰莘旭妮李树民
- 关键词:胸腺素发酵
- 重组胸腺素α1 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌的构建与表达被引量:5
- 2012年
- 目的构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL-C2x-Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL-C2x-Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP-Tα1),采用Westernblot对MBP-Tα1进行鉴定。结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP-Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6%,分子量约为45×103。结论工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础。
- 刘中禄陶翠兰莘旭妮李树民
- 关键词:基因克隆
- 一种胸腺素alphal(Tαl)类似物及生产工艺和医用途
- 本发明公开一种胸腺素alpha1(Ta1)类似物及生产工艺和医用途,通过对天然蛋白的分子设计与基因工程改造,与天然的Ta1相比具有更高的生物活性,可以最终取代Ta1的化学合成,从而减少由于化学合成生产Ta1给自然界带来的...
- 李树民江禹赵翠波
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- 胸腺素α1-胸腺生成素-2基因工程融合蛋白
- 本专利涉及一种高效融合蛋白,特征为将胸腺素a1和胸腺生成素-2通过基因工程重组技术连接组成高效的融合蛋白,经表达、纯化出的融合蛋白具有很强的促进伤口愈合的功效。应用本发明得到的融合蛋白,用于创伤与溃疡性肠炎的治疗。
- 李树民王福军赵翠波莘旭妮
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- 猪干扰素的原核表达、纯化及抗病毒活性的检测
- 方法:为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究使用全基因合成方法,合成了编码猪干扰素成熟肽的基因全序列,并克隆入pET28a载体中进行原核表达,使用原核细胞发酵罐对表达菌株扩大培养,表达融合重组猪干扰素蛋白,对蛋白进...
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